簡要描述:和(he)元(yuan)李(li)記EZ Trans慢病(bing)毒(du)包(bao)裝(zhuang)試劑(ji)盒(he)(EZ Trans Lentiviral Packaging Kit)包(bao)含:慢病(bing)毒(du)包(bao)裝(zhuang)質(zhi)(zhi)粒、對(dui)(dui)照質(zhi)(zhi)粒、轉染(ran)試劑(ji)(EZ Trans Regent)等三(san)個組份。和(he)元(yuan)李(li)記慢病(bing)毒(du)包(bao)裝(zhuang)試劑(ji)盒(he),提供(gong)足量、優質(zhi)(zhi)的對(dui)(dui)照質(zhi)(zhi)粒和(he)包(bao)裝(zhuang)質(zhi)(zhi)粒,省去實(shi)驗(yan)人員抽提質(zhi)(zhi)粒的工作。
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品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AC04L505/AC04L510/AC04L520 |
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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,制藥,綜合 |
產品描述
和元李記EZ Trans慢病毒包裝試劑盒(EZ Trans Lentiviral Packaging Kit)包含:慢病毒包裝質粒、對照質粒、轉染試劑(EZ Trans Regent)等三個組份。和元李記慢病毒包裝試劑盒,提供足量、優質的對照質粒和包裝質粒,省去實驗人員抽提質粒的工作。
和元李記慢病毒載體表達系統由pLenti慢病毒載體和Lentiviral Mix質粒組成。pLenti慢載體中含有HIV基本元件5’LTR和3’LTR以及WPRE等其他輔助元件,表達框為U6-shRNA(NC)-CMV-EGFP-2A-Puro,含綠色熒光和puro真核抗性。客戶可以根據不同的實驗目的針對plenti載體改造用于啟動子、基因功能功能研究,穩定株篩選等。Lentiviral Mix能夠表達病毒包裝需要的各種必需原件,可以兼容第二代和第三代的慢病毒包裝系統。
訂購(gou)信(xin)息
產品名(ming)稱 | 貨號 | 規格 |
EZ Trans 慢病毒包(bao)裝(zhuang)試劑(ji)盒 | AC04L505 | 5T |
EZ Trans 慢(man)病毒包裝試劑盒(he) | AC04L510 | 10T |
EZ Trans 慢病(bing)毒包裝試劑盒 | AC04L520 | 20T |
產(chan)品(pin)組分
貨號(hao) | 規格 | 組分(fen) | ||
A:對照質粒(li) | B:包裝(zhuang)質粒 | C:轉(zhuan)染試劑 | ||
AC04L505 | 5T | 16μg | 110μg | 450μL |
AC04L510 | 10T | 32μg | 220μg | 900μL |
AC04L520 | 20T | 64μg | 330μg | 1800μL |
運輸與(yu)保(bao)存(cun)
藍冰運輸。A、B組分-20℃保存,C組分4℃保存,有效期12個月。
使用方法(fa)
以10 cm培養皿為例(1皿為1T)
1. 細(xi)胞準備:293T細胞按照6×105cells/mL的細胞密度傳代到10cm培養皿中,第二天細胞長到80%-85%時準備轉染。
2. 轉(zhuan)染前換(huan)液:轉染前1h將需要轉染的細胞更換新鮮的DMEM,10mL/皿。
3. 轉染:
1) 取1.5mL EP管記為質粒混合液(管A),加入500uL DMEM,16μg質粒DNA(可自行改造)和22μg包裝質粒,振蕩混勻;
2) 另取1.5mL EP管記為轉染試劑混合液(管B),加入500uL DMEM,90μL 轉染試劑,振蕩混勻。
3) 再將管B緩慢加入到管A中,輕輕混勻,靜置8min形成復合物,后將混合液均勻滴加到提前換好液的10cm培養皿中,輕輕混勻,放入培養箱中培養
A管 | DMEM | 500μL |
DNA | 16μg | |
包裝質粒 | 22μg | |
B管 | DMEM | 500μL |
轉染試劑(ji) | 90μL |
4. 轉染后換液(ye):轉染后6-8h,將培養皿中的培養基吸掉,棄于廢液杯中,然后加入10mL 培養基(含有血清和抗生素)繼續培養。
5. 病毒收集(ji):轉染48h后,吸取上清液于50mL 離心管中,4000rpm離心10min, 4℃,將上清液用0.45um過濾器過濾轉移到新的50mL 離心管中。此時上清液中的病毒顆粒可以直接去檢測滴度或者感染目的細胞,如果對病毒的滴度及純度有較高要求,可進行后續操作。
6. 病毒濃縮(可選):每10mL 病毒上清液加入2.5mL EZ慢病毒濃縮液(CAT:AC04L442),混勻,4℃放置2h,4000rpm離心30min,吸棄上清。
7. 病毒分裝及保存(可選):吸取EZ慢病毒凍存液(CAT:AC04L453)1mL重懸上述病毒濃縮沉淀,輕輕混勻后-80℃保存。病毒溶液可分裝保存,避免反復凍融。
注意事項
1. 本產品僅限(xian)于科(ke)學實(shi)驗(yan)研究使用(yong),不得用(yong)于臨床診(zhen)斷、治療等領域。
2. 所有慢病毒操作均應盡量在BSL2*生物安全柜中進行,并佩戴一次性醫*口罩和手套。
3. 病毒切忌反復凍融,凍融一次病毒滴度降低10%-20%左右。
4. 病毒儲存6個月后,建議在使用前重新測定病毒滴度。
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