EZ Cell Transfection Reagent，EZ Trans 細胞轉染試劑(ji)（高(gao)效(xiao)）

產品(pin)描(miao)述

EZ Trans細(xi)胞(bao)(bao)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑作為新一代的(de)(de)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑，其轉(zhuan)染(ran)原理是帶正電(dian)的(de)(de)陽(yang)離子聚合物(wu)與(yu)核酸(suan)中(zhong)帶負電(dian)的(de)(de)磷酸(suan)基(ji)團形成帶正電(dian)的(de)(de)復合物(wu)后與(yu)細(xi)胞(bao)(bao)表面帶負電(dian)的(de)(de)蛋白多糖相互(hu)作用(yong)(yong)，并通過(guo)胞(bao)(bao)吞作用(yong)(yong)進(jin)入細(xi)胞(bao)(bao)。

經過李(li)記生(sheng)物的(de)優化(hua)處理，本產(chan)品具有轉染效率高，細(xi)胞毒(du)性低，操作簡單(dan)，重復性好(hao)，適用范(fan)圍(wei)廣(guang)等特點。

　　EZ Trans細胞轉染試劑與Thermo/ Lipo 2000/Invotrigen/ Lipofectamine 2000等產品相比，操作更便捷，詳見使用方法。

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保存(cun)方法(fa)

冰袋運(yun)輸，4℃保存(cun)，保質(zhi)期12個月。不(bu)可冷(leng)凍！

使(shi)用方法（以 24 孔板為例(li)，其他培養皿中(zhong)轉染(ran)請參考表1）

1. 接種細胞

對于貼壁細(xi)胞，轉染前18-24 h進行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuan)染時的密度(du)大約(yue)在80%左右。對于懸浮細胞，轉(zhuan)染當天，配制EZ Trans-DNA復合物之(zhi)前進行鋪板(ban)，每(mei)500 µL生長培養基中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養液中的血(xue)清(qing)不影(ying)響轉(zhuan)染(ran)效(xiao)率。轉(zhuan)染(ran)試劑使(shi)用(yong)量受細胞類(lei)型及(ji)其他實驗條件影(ying)響，建議初次使(shi)用(yong)時設置梯(ti)度(du)進(jin)行優化合適的使(shi)用(yong)量。

2. 準備(bei)EZ Trans-DNA復(fu)合(he)物(wu)

⑴對于(yu)每(mei)孔細胞，將(jiang)1 μg質粒DNA稀釋到40 μL無(wu)血(xue)清(qing)的高糖DMEM培(pei)養基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培(pei)養基），混勻(yun)。

⑵對于(yu)每孔細胞，將3 μL EZ Trans轉(zhuan)染試劑稀釋到40 μL無血(xue)清的高糖(tang)DMEM培養基（或者(zhe)OPTI-MEM Ⅰ 培養基），輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)混(hun)勻。

【注】：無(wu)血清的高糖(tang)DMEM培(pei)(pei)養基是稀釋液，不能使(shi)用含血清的培(pei)(pei)養基進行DNA和EZ Trans轉(zhuan)染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉(zhuan)染復合物的形(xing)成(cheng)過程不能含有(you)血清。

（3）將稀(xi)釋(shi)好(hao)的(de)EZ Trans轉染(ran)試劑盡(jin)快全(quan)部加入到已稀(xi)釋好的質粒DNA中，輕輕混(hun)勻。

【注】：此混合的順(shun)序不能反向進行。

（4）室(shi)溫(wen)放置(zhi)10-15 min，以(yi)形成EZ Trans-DNA復合物(wu)。

3. 轉(zhuan)染細(xi)胞

（1）將上(shang)述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuan)染復合物(wu)均(jun)勻滴(di)入到(dao)含(han)細(xi)胞的(de)培養皿中。輕(qing)輕(qing)晃動培養皿或(huo)輕(qing)微振蕩，讓EZ Trans-DNA復合物(wu)分散均(jun)勻。

（2）在37℃，5% CO₂培(pei)(pei)養(yang)(yang)箱培(pei)(pei)養(yang)(yang)6-18 h，去除含(han)EZ Trans-DNA復合(he)物的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)液，更換新的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)液，繼續培(pei)(pei)養(yang)(yang)至對轉(zhuan)入基因表達(da)分(fen)析。

【注】：篩選穩定(ding)轉(zhuan)染細(xi)(xi)胞株，轉(zhuan)染細(xi)(xi)胞24 h后，將(jiang)細(xi)(xi)胞傳代(dai)至(zhi)新鮮的生(sheng)長培養基中(zhong)（將(jiang)細(xi)(xi)胞稀釋10倍以上），在37℃，5% CO₂培養(yang)箱中孵育24 h，加(jia)入(ru)篩(shai)選培養(yang)基。在有(you)轉(zhuan)染抗性(xing)基因相(xiang)匹配的藥(yao)物(wu)(wu)篩(shai)選條件下，約 1～2周可篩(shai)選到耐藥(yao)性(xing)克隆，在這期間需經常更換含篩(shai)選藥(yao)物(wu)(wu)的生長培養(yang)基。

注意事項

1. 質(zhi)粒(li)質(zhi)量：請務必使用高純(chun)度無內毒素轉染級質粒。通(tong)過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260 nm / 280 nm比值確定 DNA 純度（比值應該在1.8～2.0的范(fan)圍之內）。如(ru)有可能，請(qing)通過瓊脂糖凝膠(jiao)電泳檢測(ce)質粒的完整性。

2. 細胞條件：使用(yong)適當保存和經(jing)常傳代的健康細(xi)(xi)胞。確保細(xi)(xi)胞沒(mei)有被細(xi)(xi)菌、真菌或支(zhi)原體污染(ran)。如果細(xi)(xi)胞是近期復(fu)蘇的液氮凍(dong)存細(xi)(xi)胞，請在(zai)轉(zhuan)染(ran)前至少傳代兩次。建議使用(yong)GIBCO或者(zhe)李記生物(wu)的胎牛血清培養細(xi)(xi)胞。

3. 細胞培養液要求： EZ Trans細(xi)(xi)胞(bao)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑可用(yong)于有(you)血清(qing)培養(yang)(yang)基的轉(zhuan)染(ran)，并(bing)且轉(zhuan)染(ran)前不需(xu)要(yao)換(huan)培養(yang)(yang)基。但是，制備轉(zhuan)染(ran)復合(he)物(wu)(wu)時要(yao)求用(yong)無(wu)血清(qing)培養(yang)(yang)基稀釋DNA和(he)轉(zhuan)染(ran)試(shi)劑，因為血清(qing)會影響復合(he)物(wu)(wu)的形(xing)成。確保細(xi)(xi)胞(bao)培養(yang)(yang)液(ye)沒有(you)被細(xi)(xi)菌(jun)、真菌(jun)或(huo)支(zhi)原體污(wu)染(ran)。轉(zhuan)染(ran)時培養(yang)(yang)液(ye)中不添加抗生素。

4. DNA濃(nong)度(du)和(he)EZ Trans細胞轉染(ran)試劑量的優化：DNA濃(nong)度和(he)轉(zhuan)染(ran)試劑(ji)使用(yong)量(liang)受(shou)細胞類型及其(qi)他實(shi)驗條件影(ying)響(xiang)，初次使用(yong)應優(you)化DNA濃(nong)度和(he)轉(zhuan)染(ran)試劑(ji)量(liang)以得(de)到大(da)的(de)轉(zhuan)染(ran)效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4 μL體(ti)積(ji)EZ Trans細胞轉染(ran)試(shi)劑(ji)進(jin)行優化(hua)。DNA和轉染(ran)試(shi)劑(ji)的比例，通(tong)常推薦(jian)是1:2~1:5。

表(biao)1：不同培養體(ti)積對應(ying)的待(dai)轉DNA、EZ Trans、稀(xi)釋液用量

【注】：該(gai)表使用(yong)量(liang)僅供參考，具體使用(yong)量(liang)還需根(gen)據細胞(bao)類型及(ji)其他實驗條件(jian)進行優化。使用(yong)時DNA（μg）: EZ Trans細胞(bao)轉染試劑（μL）比值(zhi)保持在1:2~1:5。

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