咨詢熱線(xian)
18201805506
18201805506
簡要(yao)描述：EZ Trans細(xi)胞(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)（Ⅱ）使(shi)用新型陽離子聚(ju)合(he)物(wu)，在(zai)保留傳統陽離子聚(ju)合(he)物(wu)優點同時，有兩個重要改進(jin)，一是(shi)顯著降低了轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)毒性(xing)；二(er)是(shi)顯著提高(gao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)，細(xi)胞(bao)(bao)的(de)適用范(fan)圍更廣。經(jing)比(bi)對(dui)試(shi)驗，在(zai)選(xuan)用的(de)測試(shi)細(xi)胞(bao)(bao)中，轉(zhuan)(zhuan)染(ran)效(xiao)率(lv)、細(xi)胞(bao)(bao)毒性(xing)均優于(yu)大(da)部分(fen)市售轉(zhuan)(zhuan)染(ran)試(shi)劑(ji)產品(pin)，接(jie)近或超過Lipo3000。
產品型號：AC04L011廠(chang)商性質(zhi)：生產廠家更(geng)新時間：2023-10-07訪(fang) 問 量：3896產品分類
Product Category相關文章
Related Articles詳細介紹
| 品牌 | 其他品牌 | 貨號 | AC04L011 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 1mL | 供貨周期 | 現貨 |
| 主要用途 | 細胞轉染 | 應用領域 | 化工,生物產業,綜合 |
產品描述
EZ Trans細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試劑Ⅱ，作(zuo)為(wei)新一(yi)代的(de)(de)轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)試劑，其轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)原理是(shi)帶(dai)正(zheng)電的(de)(de)聚合(he)物與核酸分子(zi)的(de)(de)帶(dai)負(fu)電的(de)(de)磷酸基團形(xing)成帶(dai)正(zheng)電的(de)(de)復合(he)物后，與細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)表面帶(dai)負(fu)電的(de)(de)蛋白多糖相互(hu)作(zuo)用，并通過胞(bao)(bao)吞作(zuo)用進入細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)。該(gai)產品經過本公司的(de)(de)優化(hua)處(chu)理，具有轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)效率高，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)(bao)毒性(xing)低，操(cao)作(zuo)簡單(dan)，重復性(xing)好(hao)，適用范圍廣等(deng)特點。
訂購信息
| 產品名稱 | 貨(huo)號 | 規格 | 價格 |
| EZ Trans細胞轉染試劑（Ⅱ） | AC04L011 | 1 mL | 690 |
保存方法
冰袋(dai)運輸，4℃保(bao)存，保(bao)質期12個月。不(bu)可冷凍！
使用方法
（以 24 孔板為例，其他培養皿中轉染請參考表1）
1. 接種細胞
對于貼壁細胞，轉染前18-24 h進行鋪板（不含抗生素），使其在轉染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞，轉染當天，在配制EZ Trans-DNA復合物之前進行鋪板，每500 µL生長培養基中加入4~8×105cells。
【注】：培養液中的血清不影響轉染效率。轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度進行優化合適的使用量。
2. 準備EZ Trans-DNA復合物
（1）對于每孔細胞，將1 μg 質粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基（或OPTI-MEM I 培養基），混勻。
（2）對于每孔細胞，將3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基（或者OPTI-MEM I 培養基），輕輕混勻。
【注】：無血清的高糖DMEM培養基是稀釋液，不能使用含血清的培養基進行DNA和EZ Trans轉染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉染復合物的形成過程不能含有血清。
（3）將稀釋好的EZ Trans轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質粒DNA中，輕輕混勻。
【注】：此混合的順序不能反向進行。
（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復合物。
3. 轉染細胞
（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動培養皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復合物分散均勻。
（2）在37℃，5% CO2培養箱培養6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復合物的培養液，更換新的培養液，繼續培養至對轉入基因表達分析。
【注】：篩選穩定轉染細胞株，轉染細胞24 h后，將細胞傳代至新鮮的生長培養基中（將細胞稀釋10倍以上），在37℃，5% CO2培養箱中孵育24 h，加入篩選培養基。在有轉染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經常更換含篩選藥物的生長培養基。
注意事項
1.質粒質量：請務必使用高純度無內毒素轉染級質粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度，260 nm / 280 nm比值確(que)定DNA純度（比值應該在1.8～2.0的范圍之內(nei)）。如有可能，請(qing)通(tong)過瓊(qiong)脂(zhi)糖凝膠電(dian)泳檢測質粒的完(wan)整性。
2. 細胞條件：使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養細胞。
3. 細胞培養液要求：EZ Trans細胞轉染試劑可用于有血清培養基的轉染，并且轉染前不需要換培養基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養基稀釋DNA和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。確保細胞培養液沒有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時培養液中不添加抗生素。
4. 試劑用量的優化：DNA濃度和轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，初次使用應優化DNA濃度和轉染試劑量以得到大的轉染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA使用 1～4 μL 體積EZ Trans細胞轉染試劑進行優化。DNA和轉染試劑的比例，通常推薦是1:2~1:5。
| 培養器皿 | 培(pei)養液(ye)體(ti)積（mL） | DNA量(liang)（μg） | EZ Trans (μL) | 稀釋液(μL) |
| 48孔(kong)板 | 0.3 | 0.5 | 1.5 | 2 × 25 |
| 24孔板 | 0.5 | 1 | 3 | 2 × 40 |
| 12孔板 | 0.75 | 1.5 | 4.5 | 2 × 60 |
| 6孔(kong)板 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
| 35 mm培養皿 | 1 | 3 | 9 | 2 × 125 |
| 60 mm 培養皿 | 3 | 6 | 18 | 2 × 250 |
| 100 mm 培(pei)養(yang)皿 | 9 | 12 | 36 | 2 × 500 |
【注】：該表使用量僅供參考，具體使用量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化。使用時DNA（μg）: EZ Trans細胞轉染試劑（μL）比值保持在1:2~1:5。
產品咨詢
掃一掃，關注微信電話
微信掃一掃
微信掃一掃
當前位置：