EZ Trans細胞轉染試劑與EZ 慢病毒系列/病毒轉染細胞試劑

轉染試劑產品描述(shu)

EZ Trans細胞轉染(ran)試劑作(zuo)為(wei)新一代的轉染(ran)試劑，其轉染(ran)原理是帶正電的陽離(li)子(zi)聚(ju)合物與(yu)核酸(suan)中帶負電的(de)磷(lin)酸(suan)基(ji)團(tuan)形成帶正電的(de)復合(he)物后與(yu)細(xi)胞表面帶負電的(de)蛋(dan)白多糖相互(hu)作用，并通(tong)過胞吞作用進入細(xi)胞。

本產品經過李記(ji)生物的優化(hua)處理，具有轉染效率高(gao)，細胞毒性低，操作簡單，重復性好，適用(yong)范圍廣(guang)等特點。

以下為高效轉染試劑說明書，其他產品/病毒轉染細胞試劑詳情請問銷售人員。

細胞轉染試劑與慢病毒(du)訂購信息

轉(zhuan)染試劑運輸與保(bao)存

藍冰運(yun)輸(shu)。4℃保存，有效期(qi)12個月。【注】：不(bu)可冷凍！

高效(xiao)轉(zhuan)染試劑(ji)使用方(fang)法(fa)（以 24 孔板為(wei)例(li)，其他培養皿中(zhong)轉染請參考(kao)表1）

1. 接(jie)種細(xi)胞

對于貼壁細胞(bao)，轉染前(qian)18-24 h進行鋪板（不(bu)含抗生素），使其在轉染時的(de)密度大約在80%左(zuo)右。對于懸浮細胞，轉染當天(tian)，配(pei)制EZ Trans-DNA復合物之前進行鋪板，每500 µL生長培(pei)養(yang)基(ji)中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養液中的血清不影響轉(zhuan)染效率。轉(zhuan)染試劑使用(yong)量受(shou)細胞類型及其他實驗條件(jian)影響，建議初(chu)次使用(yong)時設置梯度進行優(you)化最(zui)佳使用(yong)量。

2. 準備EZ Trans-DNA復合物

（1）對于每孔細(xi)胞，將1 μg質粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基(ji)（或者(zhe)OPTI-MEM Ⅰ 培養基(ji)），混勻。

（2）對于每孔(kong)細胞，將3 μL EZ Trans轉染(ran)試劑稀(xi)釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基（或者(zhe)OPTI-MEM Ⅰ 培養基），輕輕混(hun)勻。

【注(zhu)】：無血清(qing)的高糖(tang)DMEM培養基是稀(xi)釋液，不能使用含血清的(de)(de)培養基進行DNA和EZ Trans轉(zhuan)染(ran)試劑的(de)(de)稀(xi)釋。因為(wei)EZ Trans-DNA轉染(ran)復(fu)合物的形成(cheng)過(guo)程不能含有血清。

（3）將(jiang)稀釋好的EZ Trans轉染(ran)試劑盡快全部加入(ru)到已(yi)稀釋好的(de)質粒DNA中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序(xu)不能反向進行(xing)。

（4）室溫放(fang)置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復合(he)物。

3. 轉染細胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均勻(yun)滴入到含(han)細胞的培養(yang)皿中。輕輕晃動培養(yang)皿或輕微振蕩(dang)，讓EZ Trans-DNA復合物分(fen)散均勻(yun)。

（2）在37℃，5% CO₂培養箱培養6-18 h，去(qu)除含EZ Trans-DNA復(fu)合物的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，更換新的(de)培(pei)養(yang)液(ye)，繼續培(pei)養(yang)至(zhi)對(dui)轉入(ru)基因(yin)表達(da)分(fen)析(xi)。

【注(zhu)】：篩選穩定(ding)轉染細胞(bao)株，轉染細胞(bao)24 h后，將細(xi)胞傳代(dai)至新鮮的生長培養(yang)基中（將細(xi)胞稀釋10倍以上），在(zai)37℃，5% CO2培(pei)養箱(xiang)中孵育(yu)24 h，加入(ru)篩選(xuan)培(pei)養基。在(zai)有轉染抗性基因(yin)相匹配的藥物篩選(xuan)條件下(xia)，約 1～2周可篩選(xuan)到耐藥性克(ke)隆，在(zai)這期(qi)間需經常更換(huan)含篩選(xuan)藥物的生長培(pei)養基。

注意事項

1. 本產品僅限于(yu)科(ke)學實(shi)驗研究使用(yong)，不得用(yong)于(yu)臨床診斷、治療等領域。

2. 質粒質量：請務必使用高純度無內毒(du)素轉染級(ji)質粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃(nong)度，260 nm / 280 nm比值確定 DNA 純度（比值應該在1.8～2.0的(de)范(fan)圍之內(nei)）。如有可能(neng)，請通過(guo)瓊脂糖凝膠電泳檢(jian)測質粒(li)的(de)完(wan)整性。

3. 細胞(bao)條(tiao)件：使用(yong)適當保存和(he)經常(chang)傳代(dai)的健(jian)康細胞(bao)(bao)。確(que)保細胞(bao)(bao)沒有(you)被細菌、真菌或支原體污染。如(ru)果細胞(bao)(bao)是近期復蘇的液氮凍(dong)存細胞(bao)(bao)，請在(zai)轉染前(qian)至少傳代(dai)兩次(ci)。建議(yi)使用(yong)胎(tai)牛血清（貨號：AC03L055）培養(yang)細胞(bao)。

4. 細胞培養液要求(qiu)：EZ Trans細(xi)胞轉染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)可用于有血(xue)清培(pei)養基(ji)的轉染(ran)(ran)，并(bing)且轉染(ran)(ran)前不(bu)需要換(huan)培(pei)養基(ji)。但是，制備轉染(ran)(ran)復合物(wu)時(shi)要求用無(wu)血(xue)清培(pei)養基(ji)稀釋DNA和轉染(ran)(ran)試(shi)劑(ji)，因為血(xue)清會(hui)影響復合物(wu)的形成。確(que)保細(xi)胞培(pei)養液(ye)沒有被細(xi)菌、真菌或支(zhi)原體污(wu)染(ran)(ran)。轉染(ran)(ran)時(shi)培(pei)養液(ye)中不(bu)添加抗生素(su)。

5. DNA濃度和(he)EZ Trans細胞轉染試劑量的優化(hua)：DNA濃度(du)和轉染(ran)(ran)試(shi)(shi)劑使用(yong)量受(shou)細胞類型及(ji)其(qi)他實驗(yan)條件影響，初次使用(yong)應優(you)化DNA濃度(du)和轉染(ran)(ran)試(shi)(shi)劑量以(yi)得到最(zui)大的轉染(ran)(ran)效率。使用者可(ke)嘗試每 1 μg DNA使(shi)用 1～4 μL體(ti)積EZ Trans細(xi)胞轉染試(shi)劑進(jin)行優化。DNA和轉染試(shi)劑的比例(li)，通(tong)常推薦(jian)是1:2~1:5。

   表1：不同培養(yang)體積對應(ying)的待(dai)轉(zhuan)DNA、EZ Trans、稀釋液用(yong)量

【注】：該表使(shi)用(yong)量僅供參考，具(ju)體使(shi)用(yong)量還需根據細胞類型及其他實驗條件進行優化(hua)。使(shi)用(yong)時(shi)DNA（μg）: EZ Trans細胞轉染試劑(ji)（μL）比值保持在1:2~1:5。

相(xiang)關產(chan)品推(tui)薦

活(huo)性檢測(ce)CCK-8細胞增殖與(yu)毒性檢測試劑(ji)盒（貨號(hao)：AC11L053）

EZ Trans細胞轉染試(shi)劑(ji)（高效(xiao)）（貨號：AC04L092）