EdU（動物注射）

產(chan)品描述
細(xi)(xi)胞(bao)增殖是(shi)評(ping)價細(xi)(xi)胞(bao)活性(xing)、代(dai)謝、生(sheng)理(li)和(he)病理(li)狀況(kuang)的重要指(zhi)標。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是一種(zhong)胸腺(xian)嘧啶(ding)核(he)苷(gan)類似物(wu)，其連(lian)有的(de)炔烴(jing)基(ji)團在(zai)天然化(hua)合物(wu)中很(hen)少見，能夠在(zai)細(xi)胞(bao)(bao)增(zeng)殖(zhi)時期(qi)代替胸腺(xian)嘧啶(ding)(T)摻(chan)入正(zheng)在(zai)復(fu)(fu)制的(de)DNA分(fen)子中，通過(guo)基(ji)于(yu)EdU與(yu)熒光染料的(de)特異性(xing)共軛反應(ying)，把(ba)熒光基(ji)團標(biao)記到新合成的(de)含(han)有EdU的(de)DNA上面，這(zhe)樣可以進(jin)行高效快速的(de)檢測出DNA復(fu)(fu)制活性(xing)，此(ci)技術廣(guang)泛(fan)應(ying)用于(yu)細(xi)胞(bao)(bao)增(zeng)殖(zhi)、細(xi)胞(bao)(bao)分(fen)化(hua)、生長與(yu)發育(yu)、DNA損傷修復(fu)(fu)等方面的(de)研究(jiu)。
傳統的(de)免疫(yi)熒光染色(BrdU)檢(jian)測方(fang)法(fa)需要(yao)DNA變性、抗(kang)原(yuan)修(xiu)復、抗(kang)原(yuan)抗(kang)體過夜孵育等(deng)復雜繁瑣的操(cao)作步(bu)驟。而EdU檢(jian)測方(fang)法(fa)不需要(yao)劇烈的DNA變性，只需溫和(he)的細(xi)胞固(gu)定(ding)化和(he)透化處理，能夠(gou)較好(hao)地(di)保護細(xi)胞形態、DNA整(zheng)體結構(gou)及細(xi)胞內抗(kang)原(yuan)識別位點，操(cao)作步(bu)驟更加快速、靈敏和(he)準確。EdU與胸腺嘧啶(T)結構(gou)非(fei)常相似，大小卻只有BrdU抗(kang)體的1/500，很(hen)容易在細(xi)胞內擴散；無需抗(kang)原(yuan)抗(kang)體反(fan)應，能在細(xi)胞和(he)組織水平更快速便(bian)捷地(di)反(fan)映DNA復制活性。
本試劑適用(yong)于小鼠、大鼠及其它動物模型的各種(zhong)組織器官的細胞增(zeng)殖(zhi)情(qing)況檢測。
訂(ding)購信息

產(chan)品組分

運輸(shu)與保存
常溫運輸。4℃保存，有效期12個月。
使用方(fang)法(fa)
本(ben)試劑(ji)盒適用于各種(zhong)動(dong)物活體注射，穩定性較好(hao)。注射標記后可將目標組織制備為石蠟或冰凍切片進行EdU染(ran)色檢測。【注】：切(qie)片后可搭配EdU細胞增殖成像分析試(shi)劑盒（李記貨號：AC11L251）使用，進(jin)行后續的切片EdU染(ran)色檢測。
動物(wu)實(shi)驗方法(fa)，以1cm×1cm切片(pian)為例
實驗前(qian)須知：EdU的(de)(de)分(fen)子量(liang)為(wei)252.223，易溶于水，PBS，生理鹽水等溶液(ye)，便于動物(wu)注射使用(yong)。建(jian)議EdU的(de)(de)初始給藥量(liang)為(wei)5mg/kg，稀釋濃度為(wei)0.5-1mg/mL。具體動物(wu)模型的(de)(de)注射劑量(liang)可根據相關文獻(xian)進行調節。【注】：我們根據每只小(xiao)鼠20g的體(ti)重(zhong)為例，10mg EdU粉(fen)末(mo)可以注射100只小(xiao)鼠（100T）。
動物EdU注射
【注】：①注(zhu)射(she)方式：依據實(shi)驗決(jue)定，如：腹腔(qiang)注(zhu)射(she)、皮下注(zhu)射(she)、肌肉注(zhu)射(she)、尾(wei)靜脈注(zhu)射(she)等方式。
②標(biao)(biao)記(ji)(ji)時間：最佳標(biao)(biao)記(ji)(ji)時間依(yi)據具(ju)體實(shi)驗目(mu)的(de)(de)(de)而定，增殖(zhi)快速的(de)(de)(de)組(zu)織及器官采用(yong)短時間標(biao)(biao)記(ji)(ji)（<12 h）（例(li)如(ru)(ru)小腸），增殖(zhi)速度(du)慢的(de)(de)(de)組(zu)織及器官可采用(yong)長時間標(biao)(biao)記(ji)(ji)（如(ru)(ru)7 d或(huo)更長時間，例(li)如(ru)(ru)大(da)腦）。
③標記濃度(du)：最佳標記濃度(du)依據(ju)具(ju)體實驗而定。
④取樣部位：根(gen)據實驗目的而(er)定，一次標(biao)記(ji)可(ke)對多(duo)種組(zu)(zu)(zu)織和器官進行組(zu)(zu)(zu)織切片。因小腸上皮組(zu)(zu)(zu)織增殖速(su)度較快，標(biao)記(ji)時間較短（動物注射6 d后取組(zu)(zu)(zu)織），建議預實驗可(ke)以取小腸組(zu)(zu)(zu)織檢測細(xi)胞增殖情(qing)況(kuang)，作為(wei)陽性對照(zhao)。
切片處理
1.切片前處(chu)理：組織器官(guan)(guan)先進行清(qing)洗，以去除血液、組織或器官(guan)(guan)中(zhong)殘(can)留(liu)的EdU，降低背景。
2.切(qie)片厚度(du)：3-10um為宜，切(qie)片過(guo)厚可能(neng)影(ying)響(xiang)切(qie)片背景(jing)。
3.切(qie)片后處(chu)理(li)：①石蠟切(qie)片脫(tuo)蠟：二(er)甲苯洗脫(tuo)3次(ci)，每次(ci)10 min，乙醇(chun)梯度（100%，95%，85%，75%）脫(tuo)水各(ge)1次(ci)，去離子(zi)水洗脫(tuo)1次(ci)。②冰(bing)凍切(qie)片處(chu)理(li)：室溫放置30 min后，4℃丙酮固(gu)定10 min，PBS清洗3次(ci)，每次(ci)5 min。
4.2mg/mL 甘.an.suan清洗切片10 min。
5.加入100uL 0.5% Triton X-100細胞(bao)通透劑，室溫孵育10 min，再用PBS清洗1次。
后續進行EdU染色步驟需要搭(da)配(pei)EdU細胞增殖成像(xiang)分析(xi)試劑盒（李記貨號：AC11L251）進行(xing)以下(xia)步驟：
EdU染(ran)色
1.通過用10：1去離子水稀(xi)釋反應緩沖液(ye)，進行(xing)配制1×反應緩沖液(ye)。
2.按照溶(rong)解200 mg緩沖添加劑溶(rong)于1 mL 去離子水的比例稱取適量(liang)的粉(fen)末(mo)進行溶(rong)解，即(ji)為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xian)用現(xian)配(pei)。
【注】：緩沖添加劑為(wei)白色(se)粉末，較難準確稱量，稱量范圍可稍微放寬，但(dan)是不應超過±;20%，且該粉末較(jiao)易氧化，使用后請(qing)旋緊管(guan)蓋(gai)，如試劑出現棕黃色，則需報(bao)廢或更換。
3.按照以下的表格進(jin)行染色反應液的配(pei)制：

4.加(jia)入以上配置好的(de)檢(jian)測混合液，以覆(fu)蓋組織為宜，避光、室溫孵育(yu)30 min。
5.棄(qi)染色反(fan)應(ying)液，加(jia)入300 μL 0.5% Triton X-100細胞滲透液清洗(xi)2-3次，每次10 min。
6.棄細胞滲透液，用PBS洗兩次，每次 5 min。
其(qi)它染色（自備）
（可選）可以根(gen)據實驗(yan)需要進行細胞表面或細胞內抗(kang)原的抗(kang)體(ti)染色。
DNA染色
1.將(jiang)Hoechst 33342 *超級純(chun)*（李記貨號：AC12L021）用(yong)PBS溶液(ye)1：1000進行稀釋得到1×Hoechst染色液(ye)。
2.加(jia)入150 μL 1×Hoechst染色(se)液，室溫(wen)避光孵育10-15 min后，棄染色液。
3.PBS清洗(xi)細胞2-3次(ci)，去掉洗(xi)液。
圖像獲取及分析
　　建議染色(se)完成(cheng)后立即進行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請于4℃條件下避光濕潤保(bao)(bao)存3 d之內完(wan)成拍照(zhao)。可使(shi)用抗(kang)熒光淬(cui)滅(mie)封片(pian)劑進行封片(pian)后于4℃條件下保(bao)(bao)存及拍照(zhao)檢測。

注意事項(xiang)
1.本產(chan)品(pin)僅(jin)限于科學實驗(yan)研究使用(yong)，不得用(yong)于臨床(chuang)診斷、治療等(deng)領域(yu)。
相(xiang)關產品推(tui)薦
Hoechst 33342 *超級純*（貨號：AC12L021）
抗熒光淬(cui)滅封(feng)片劑（貨號：AC28L532）