EdU細胞增殖流式檢測試劑盒

產品(pin)描述
細胞(bao)(bao)增殖是評(ping)價(jia)細胞(bao)(bao)活性(xing)、代謝、生理(li)(li)和(he)病理(li)(li)狀況(kuang)的重要指標。EdU (5-Ethynyl-2`- deoxyuridine)是(shi)一種(zhong)胸(xiong)腺(xian)嘧啶核(he)苷類似物(wu)，其(qi)連(lian)有的(de)(de)炔(gui)烴基團(tuan)在(zai)天然化(hua)合物(wu)中很少見，能夠在(zai)細胞(bao)(bao)增(zeng)殖時(shi)期代替胸(xiong)腺(xian)嘧啶(T)摻(chan)入正在(zai)復(fu)制的(de)(de)DNA分(fen)子中，通過基于(yu)EdU與熒(ying)(ying)光染料的(de)(de)特(te)異性共軛(e)反應(ying)(ying)，把熒(ying)(ying)光基團(tuan)標(biao)記到新合成(cheng)的(de)(de)含有EdU的(de)(de)DNA上面(mian)，這樣可(ke)以進(jin)行高(gao)效快速的(de)(de)檢測出DNA復(fu)制活性，此(ci)技術廣(guang)泛應(ying)(ying)用于(yu)細胞(bao)(bao)增(zeng)殖、細胞(bao)(bao)分(fen)化(hua)、生長與發(fa)育、DNA損傷修復(fu)等(deng)方面(mian)的(de)(de)研(yan)究。
傳統的免(mian)疫熒光(guang)染色(BrdU)檢測方(fang)法需(xu)(xu)要DNA變性、抗(kang)(kang)(kang)原修復、抗(kang)(kang)(kang)原抗(kang)(kang)(kang)體(ti)過夜孵育(yu)等復雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方(fang)法不需(xu)(xu)要劇(ju)烈的DNA變性，只需(xu)(xu)溫和(he)的細胞固定化和(he)透化處理，能(neng)夠較好地保護(hu)細胞形態(tai)、DNA整體(ti)結構及細胞內(nei)抗(kang)(kang)(kang)原識別(bie)位(wei)點(dian)，操作步驟更加快速、靈敏和(he)準確。EdU與胸腺嘧啶(T)結構非常相似，大小卻(que)只有(you)BrdU抗(kang)(kang)(kang)體(ti)的1/500，很容易在細胞內(nei)擴散(san)；無需(xu)(xu)抗(kang)(kang)(kang)原抗(kang)(kang)(kang)體(ti)反應，能(neng)在細胞和(he)組織水(shui)平(ping)更快速便捷地反映DNA復制活性。
訂購信息

產品組(zu)分

運輸與保(bao)存
常溫運輸。4℃保存，有效(xiao)期(qi)12個月。
使用方法
細胞培養
將細胞接種(zhong)于孔(kong)板中（以(yi)下(xia)溶液(ye)加入量是以(yi)6孔(kong)板為例），培養至正常生長階段。
藥物處(chu)理(li)
根(gen)據實驗需要(yao)進(jin)行各種(zhong)細胞處理(li)。
EdU標(biao)記
1.設(she)置(zhi)1個不加EdU標記(ji)培(pei)養基的NC對照組，以(yi)便(bian)進行流(liu)式檢測數據的背景分析(xi)。
2.將細胞培養基與(yu)EdU溶液按(an)照(zhao)500：1的(de)比例混合，制成(cheng)2×EdU標記培養基。
3.提前(qian)將(jiang)2×EdU標記培養(yang)基預熱(re)，然后將(jiang)500微(wei)升2×EdU標記培養(yang)基與等體積細(xi)胞培養(yang)基混(hun)合，獲(huo)得(de)6孔板中每孔1ml 1×EdU溶(rong)液。
【注(zhu)】：①不建議(yi)替(ti)換全部(bu)培養(yang)基(ji)，這樣可能會影響細胞增殖(zhi)的速度；②配置好(hao)的培養(yang)基(ji)建議(yi)現用現配，用量(liang)以(yi)沒過細胞為宜。
4.孵(fu)育細胞2 h，棄培養(yang)基(ji)。
【注】：①培養時(shi)間(jian)取(qu)決于細胞的(de)增殖速度和生長狀態(tai)；②大多(duo)數腫瘤(liu)細胞以及粘附(fu)細胞系均可采用2 h的(de)孵(fu)育(yu)時(shi)間(jian)。
5.將細(xi)胞收(shou)集至流式管中(zhong)，1000rpm 離心5 min，用槍(qiang)頭吸棄(qi)上清。
【注】：①如貼(tie)壁細(xi)胞，請先消(xiao)化收集；②離心轉速可按特定(ding)細(xi)胞培(pei)養經驗進行(xing)設置。
6.以1×PBS清洗細胞(bao)，1000rpm 離心5 min，用槍頭吸棄上清。
細胞的固定(ding)和通透
1.每(mei)管(guan)加(jia)入1mL 4%多聚甲(jia)醛(quan)細(xi)胞固(gu)(gu)定液固(gu)(gu)定15-30 min，1000rpm 離心5 min，棄固(gu)(gu)定液。
2.每管加入2mL 2mg/mL 甘(gan)xx，搖床(chuang)孵(fu)育(yu)5 min，以中和過量的多聚甲醛。
3.1000rpm 離(li)心(xin)5 min，棄甘xx溶液，每(mei)管加入2mL PBS洗(xi)液清洗(xi)，1000rpm 離(li)心(xin)5 min，棄上清。
4.每管加入1mL 0.5% Triton X-100細胞通(tong)透(tou)液(ye)(ye)，室(shi)溫通(tong)透(tou)10 min，1000rpm 離心(xin)5 min，棄細胞通(tong)透(tou)溶液(ye)(ye)。
5.每管(guan)加(jia)入2mL PBS洗液，室溫清(qing)洗5 min，1000rpm 離心5 min，吸棄上(shang)清(qing)。
EDU染色
1.通過用10：1去離(li)子(zi)水(shui)稀釋反(fan)應緩沖(chong)液，進行配制1×反(fan)應緩沖(chong)液。
2.按(an)照溶(rong)(rong)解 200 mg緩(huan)(huan)沖添加劑(ji)溶(rong)(rong)于1 mL去離(li)子水的(de)比例稱取(qu)適量的(de)粉末進行溶(rong)(rong)解，即為可用的(de)緩(huan)(huan)沖添加劑(ji)的(de)濃度，建議(yi)現用現配(pei)。
【注】：緩沖(chong)添加(jia)劑為白色粉末(mo)，較難準確稱(cheng)量(liang)，稱(cheng)量(liang)范(fan)圍(wei)可稍(shao)微放寬，但是不應超過±20%，且該粉末較(jiao)易氧化，使用后請旋緊管蓋，如試劑出現棕(zong)黃(huang)色，則需報(bao)廢(fei)或更換。
3.按照(zhao)以下(xia)的(de)表格進行染(ran)色反應液的(de)配制：

4.每管加入(ru)配(pei)置好的檢測混合液，體積以覆蓋細胞為宜，充(chong)分(fen)重懸(xuan)細胞，避光、室(shi)溫孵育10-30 min。
5.1000rpm 離心5 min，吸棄染色(se)反(fan)應液(ye)，每管(guan)加入2mL 0.5% Triton X-100細胞(bao)滲透液(ye)清洗(xi)2次，每次10 min；離心棄細胞(bao)滲透液(ye)，用(yong)500uL PBS重懸(xuan)細胞(bao)。
DNA染色
1.將Hoechst 33342 *超級純*(李記貨號：AC12L021)用PBS溶液1:1000進(jin)行稀(xi)釋得到(dao)1×Hoechst染(ran)色液。
2.每(mei)管(guan)加入(ru)1×Hoechst染色液(ye)，以覆蓋細胞為宜，室溫避(bi)光孵育(yu)10-15 min后，棄染色液(ye)。
3.加入500 μL PBS重懸細胞。
其它染色（自備）
（可選）可以根(gen)據實驗需(xu)要(yao)進行細胞(bao)表面或細胞(bao)內抗(kang)原的(de)抗(kang)體(ti)染色。染色完(wan)的(de)樣品上機檢(jian)(jian)測(ce)時，根(gen)據使用的(de)染料選擇合適的(de)通道檢(jian)(jian)測(ce)。
流(liu)式檢(jian)測(ce)及分析(xi)
1.建議染色完(wan)成(cheng)后立即進行流(liu)式檢測；如果條(tiao)件限制，請于4℃條(tiao)件下(xia)避光濕潤保(bao)存3 d之內完(wan)成(cheng)檢測。
2.檢(jian)測細胞數(shu)量(liang)建議盡量(liang)能達到10⁷級(ji)，若細胞(bao)數量較少，檢測的細胞(bao)數量可調整為10⁶起(qi)始進行實驗。

注意事項(xiang)

1. 本產品僅限于科學實驗研究(jiu)使用，不得用于臨(lin)床診斷、治療等(deng)領(ling)域。