Anti-GFP免疫磁珠將高質量(liang)的(de)鼠源(yuan)單克隆Anti-GFP抗體共價(jia)偶聯(lian)在超順磁性(xing)納米(mi)微球表面(mian),可(ke)特異性(xing)地與動植物(wu)或微生物(wu)裂解(jie)液(ye)、血(xue)清、腹水等(deng)中含有 GFP 標(biao)(biao)簽(qian)的(de)蛋(dan)白(bai)結合，從而用于(yu)帶有 GFP 標(biao)(biao)簽(qian)的(de)融(rong)(rong)合蛋(dan)白(bai)或其蛋(dan)白(bai)復(fu)(fu)合物(wu)的(de)免疫沉(chen)淀(dian)(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉(chen)淀(dian)(Co-IP)或純化。Anti-GFP Magnetic Beads (Anti-GFP 磁珠)，可(ke)以特異性(xing)地結合 GFP 標(biao)(biao)簽(qian)融(rong)(rong)合蛋(dan)白(bai)，并可(ke)以借助磁力架等(deng)磁分離設(she)備非常(chang)便(bian)捷地應用于(yu)帶有 GFP 標(biao)(biao)簽(qian)的(de)融(rong)(rong)合蛋(dan)白(bai)或其蛋(dan)白(bai)復(fu)(fu)合物(wu)的(de)免疫沉(chen)淀(dian)或純化等(deng)實驗。

產品優勢

1.具有(you)高效的蛋白結合能力(li)。

2.超低(di)非(fei)特異(yi)性吸附的性能。

3.配合磁力架操(cao)作省時、簡便(bian)、溫和。

4.產品穩定性高。

訂購信息

常(chang)溫運輸。4℃保存，有效期(qi) 24 個月。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培養基(ji)，用 PBS 洗細胞兩(liang)次。

2.收集(ji)細胞至 1.5 mL EP 管(guan)內，按比例加入 IP Lysis/Wash Buffer，同時加入 PMSF 等相(xiang)應的抑制劑，混(hun)勻后置于冰上靜(jing)置 5-20 min（期間混(hun)勻幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集上清液，置于(yu)冰上以備后續實(shi)驗（或置于(yu)-80 ℃長期(qi)保存）。

表 1.培養皿(min) IP Lysis/Wash Buffer 推(tui)薦使用體(ti)積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。

2.用 PBS 洗細胞(bao)(bao)(bao)一次(ci)，即用 PBS 將細胞(bao)(bao)(bao)團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞(bao)(bao)(bao)，棄上(shang)清。

3.用預冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細(xi)胞(bao)。每(mei) 50mg 細(xi)胞(bao)使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入 PMSF 等相應(ying)的抑制劑，混勻(yun)后置(zhi)于冰上靜置(zhi) 5-20 min（期間(jian)混勻(yun)幾次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集(ji)上(shang)清液，置于冰上(shang)以(yi)備后續實驗（或置于-80 ℃長期保存）。

血清樣品

一般建議(yi)建議(yi)用(yong) IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣品至目(mu)標蛋白終濃度為 50~150 µg/mL，置于冰上備用(yong)（或置于-20 ℃長期(qi)保存）。

免疫沉淀

【注】：為保證(zheng)磁珠均勻分布，使用(yong)前通過反復顛(dian)倒或輕微渦旋(xuan)混勻瓶中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Anti-GFP Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離心管中。

2.向磁珠(zhu)中加入 500 µL 預冷(leng) PBS，輕柔混(hun)勻(yun)。

3.將離(li)心(xin)管放入(ru)磁力架中收集(ji)磁珠到離(li)心(xin)管的一邊。去除上(shang)清。

4.向(xiang)離(li)心(xin)管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛(dian)倒離(li)心(xin)管數次(ci)或輕微渦旋混勻 1min。用磁(ci)力架收集磁(ci)珠。去除上清(qing)。

5.將制備好含(han)有 GST 標記(ji)蛋(dan)白加入裝有磁(ci)珠的離心管中，保持混勻室溫下孵育 1-2 h。

6.用磁(ci)力(li)架收集磁(ci)珠(zhu)，除去未結合的(de)樣品(pin)，保存以(yi)備分析。

7.向(xiang)離(li)心管中加入(ru) 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻。收(shou)集磁珠，棄上清。再重復洗(xi)兩次。

8.變(bian)性洗(xi)脫：向離(li)(li)心管中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品(pin)置于 100℃水(shui)浴或者金(jin)屬浴中加熱 10 min。通過磁(ci)力架分(fen)離(li)(li)磁(ci)珠，保留含有目的(de)抗原的(de)上清。

【注】：如需保持蛋(dan)白活性，也可(ke)采(cai)用以下洗脫方式。

低 pH 洗脫：向離心管中加入 100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下孵育離心管 5-10 min。通過(guo)磁力分離磁珠，保留(liu)含有目的抗原的上清。每 100 µL 洗出(chu)液中加入 20 µL Neutralization Buffer 來中和低 pH。

注意事項

1.本產品(pin)僅限(xian)于科學實驗研(yan)究使用，不得用于臨床診斷、治(zhi)療(liao)等領域。

2.請勿高速(su)離心、干燥(zao)或(huo)冷凍磁(ci)珠，這(zhe)些操作會導致磁(ci)珠聚(ju)集(ji)而降低結(jie)合能力(li)。

3.IP 實(shi)驗中不(bu)同類型(xing)的(de)(de)抗(kang)體與抗(kang)原(yuan)結合的(de)(de)親和性(xing)是有區別的(de)(de)，抗(kang)體與抗(kang)原(yuan)結合還會受到 IP Lysis/WashBuffer 的(de)(de)影響(xiang)，因此，如使用本實(shi)驗步(bu)驟(zou)不(bu)能獲得最佳的(de)(de)實(shi)驗結果，可自(zi)行優化操(cao)作(zuo)細節或者(zhe)篩選及配制緩沖液進行實(shi)驗，推(tui)薦使用李記生物(wu)的(de)(de)相關(guan)產品，參照相關(guan)產品推(tui)薦。

4.微(wei)球使用(yong)前應(ying)充分振蕩均勻。微(wei)球應(ying)保存在儲(chu)存溶(rong)液中(zhong)，防(fang)止干燥(zao)。

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