Anti-His免疫磁珠將高(gao)質量的(de)鼠(shu)源單(dan)克隆Anti-His抗(kang)體共價偶聯在超順(shun)磁(ci)性(xing)納(na)米微(wei)球(qiu)表面,可特異(yi)性(xing)地(di)(di)與動植物(wu)或(huo)微(wei)生物(wu)裂解液、血清、腹水等(deng)中含有 HIS 標簽(qian)(qian)的(de)蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)結(jie)合，從而用于(yu)帶(dai)有 His 標簽(qian)(qian)的(de)融合蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)或(huo)其蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)復(fu)合物(wu)的(de)免(mian)疫(yi)沉淀(Immunoprecipitation, IP)、免(mian)疫(yi)共沉淀(Co-IP)或(huo)純化。Anti-His Magnetic Beads (Anti-HIS 磁(ci)珠(zhu))，可以特異(yi)性(xing)地(di)(di)結(jie)合 HIS 標簽(qian)(qian)融合蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)，并可以借助(zhu)磁(ci)力架等(deng)磁(ci)分(fen)離設備非常便捷地(di)(di)應(ying)用于(yu)帶(dai)有 HIS 標簽(qian)(qian)的(de)融合蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)或(huo)其蛋白(bai)(bai)(bai)(bai)復(fu)合物(wu)的(de)免(mian)疫(yi)沉淀或(huo)純化等(deng)實驗。

產品優勢

1.具有高效的蛋白結合能(neng)力。

2.超低非特異性吸附的性能(neng)。

3.配(pei)合磁(ci)力(li)架操作省時、簡(jian)便、溫和(he)。

4.產品穩定性高。

訂購信息

常(chang)溫運輸。4℃保(bao)存(cun)，有效期 24 個月。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培(pei)養基，用 PBS 洗細胞兩次。

2.收集細(xi)胞(bao)至 1.5 mL EP 管內，按比例加(jia)入 IP Lysis/Wash Buffer，同時(shi)加(jia)入 PMSF 等(deng)相應(ying)的抑制劑，混勻(yun)后置于冰上(shang)靜(jing)置 5-20 min（期間混勻(yun)幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集上清(qing)液，置于冰上以備后續實驗(yan)（或置于-80 ℃長(chang)期保存）。

表(biao) 1.培養皿 IP Lysis/Wash Buffer 推(tui)薦使用體積(ji)

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄(qi)上清。

2.用(yong) PBS 洗細胞(bao)一次，即用(yong) PBS 將細胞(bao)團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞(bao)，棄上清。

3.用預冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重(zhong)懸細胞。每(mei) 50mg 細胞使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時(shi)加入 PMSF 等相應的抑(yi)制劑，混勻(yun)后置于(yu)冰上靜置 5-20 min（期間混勻(yun)幾(ji)次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集上清液，置于(yu)冰上以(yi)備后續實驗（或(huo)置于(yu)-80 ℃長期保(bao)存）。

血清樣品

一般建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣(yang)品至目(mu)標蛋(dan)白終(zhong)濃(nong)度(du)為 50~150 µg/mL，置于冰上(shang)備用（或(huo)置于-20 ℃長期保存）。

免疫沉淀

【注(zhu)】：為保證磁珠均勻分布，使(shi)用前(qian)通過反復顛(dian)倒或輕(qing)微(wei)渦旋(xuan)混勻瓶(ping)中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Anti-His Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離(li)心管中。

2.向磁珠中加(jia)入 500 µL 預(yu)冷 PBS，輕柔混(hun)勻。

3.將離心管放入(ru)磁(ci)(ci)力架中收集磁(ci)(ci)珠到離心管的一(yi)邊。去除上清。

4.向離(li)心(xin)管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離(li)心(xin)管數次或(huo)輕微渦旋混勻(yun) 1min。用磁(ci)力架收集磁(ci)珠(zhu)。去除(chu)上清。

5.將(jiang)制備好(hao)含有 GST 標(biao)記蛋白加(jia)入裝有磁珠的離心管中(zhong)，保持(chi)混勻室溫下孵育 1-2 h。

6.用磁(ci)力架收集磁(ci)珠，除去未結合的樣(yang)品，保存以(yi)備分析。

7.向離心管中加(jia)入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕(qing)柔混勻。收(shou)集磁珠(zhu)，棄上清。再重復洗(xi)兩(liang)次。

8.變性洗脫：向離心管(guan)中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置于 100℃水浴或者金屬浴中加熱 10 min。通(tong)過磁力(li)架(jia)分離磁珠，保留含有(you)目的抗原的上(shang)清。

【注】：如需(xu)保持蛋(dan)白活性(xing)，也可采用以下洗脫(tuo)方式。

低(di) pH 洗脫(tuo)：向離(li)(li)心(xin)管中加(jia)入(ru) 100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下孵(fu)育離(li)(li)心(xin)管 5-10 min。通過磁(ci)力分離(li)(li)磁(ci)珠，保留含(han)有目的抗原(yuan)的上清。每 100 µL 洗出液(ye)中加(jia)入(ru) 10 µL Neutralization Buffer 來中和低(di) pH。

注意事項

1.本(ben)產品僅限于(yu)(yu)科(ke)學實驗研究使(shi)用，不得用于(yu)(yu)臨床診斷、治(zhi)療等領域。

2.請(qing)勿高速離(li)心、干燥或冷凍磁(ci)珠，這(zhe)些操(cao)作會導致磁(ci)珠聚集而降低結合能力。

3.IP 實驗(yan)中不同類型的(de)抗(kang)(kang)體與抗(kang)(kang)原結合(he)的(de)親和性是有區(qu)別的(de)，抗(kang)(kang)體與抗(kang)(kang)原結合(he)還(huan)會受到 IP Lysis/WashBuffer 的(de)影響(xiang)，因此，如使用(yong)本實驗(yan)步(bu)驟不能(neng)獲得最佳的(de)實驗(yan)結果(guo)，可自行優化操(cao)作細節或者篩選(xuan)及配制(zhi)緩沖液進(jin)行實驗(yan)，推薦(jian)使用(yong)李記生物的(de)相(xiang)關(guan)產品，參照相(xiang)關(guan)產品推薦(jian)。

4.微(wei)球使用(yong)前應充分振蕩(dang)均勻。微(wei)球應保(bao)存(cun)在(zai)儲存(cun)溶液中(zhong)，防止干燥(zao)。

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