Anti-Flag免疫磁珠將高質量的(de)鼠源單克隆Anti-Flag抗體共價偶聯在超(chao)順(shun)磁性(xing)納米微(wei)球(qiu)表面,可特異性(xing)地與動(dong)植物(wu)或(huo)(huo)微(wei)生物(wu)裂解液、血清、腹水等中含有 Flag 標簽(qian)的(de)蛋白(bai)結(jie)(jie)合(he)，從(cong)而用于帶有 Flag 標簽(qian)的(de)融(rong)合(he)蛋白(bai)或(huo)(huo)其(qi)蛋白(bai)復合(he)物(wu)的(de)免疫(yi)沉(chen)淀(dian)(Immunoprecipitation, IP)、免疫(yi)共沉(chen)淀(dian)(Co-IP)或(huo)(huo)純(chun)化。Anti-Flag Magnetic Beads (Anti-Flag 磁珠)，也被稱為 Anti-DYKDDDDK Magnetic Beads，可以特異性(xing)地結(jie)(jie)合(he) Flag 標簽(qian)融(rong)合(he)蛋白(bai)，并可以借助磁力架等磁分離設備非常便捷(jie)地應用于帶有 Flag 標簽(qian)的(de)融(rong)合(he)蛋白(bai)或(huo)(huo)其(qi)蛋白(bai)復合(he)物(wu)的(de)免疫(yi)沉(chen)淀(dian)或(huo)(huo)純(chun)化等實驗(yan)。

產品優勢

1.具(ju)有高效(xiao)的蛋白結合能力。

2.超低非特異性(xing)吸附的(de)性(xing)能(neng)。

3.配合磁力架操作省時、簡便、溫和。

4.產品穩定性高。

訂購信息

運輸與保存

常(chang)溫運輸(shu)。4℃保存，有效期 24 個月。

技術參數

使用方法

貼壁細胞樣品

1.移去培(pei)養基，用 PBS 洗細胞兩次。

2.收集細(xi)胞(bao)至(zhi) 1.5 mL EP 管內(nei)，按比例加(jia)入(ru) IP Lysis/Wash Buffer，同時加(jia)入(ru) PMSF 等相應的(de)抑制劑，混勻(yun)后置(zhi)于冰上靜(jing)置(zhi) 5-20 min（期間混勻(yun)幾(ji)次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集上清液(ye)，置于冰上以備后續實驗（或置于-80 ℃長期保存）。

表 1.培養皿(min) IP Lysis/Wash Buffer 推薦使(shi)用體積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細胞，棄上清。

2.用(yong) PBS 洗細(xi)胞一次(ci)，即用(yong) PBS 將細(xi)胞團重懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集(ji)細(xi)胞，棄上(shang)清。

3.用(yong)(yong)預冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細胞。每 50mg 細胞使用(yong)(yong) 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同(tong)時加(jia)入 PMSF 等相應的抑制劑，混(hun)勻后置于冰上(shang)靜置 5-20 min（期間(jian)混(hun)勻幾(ji)次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集(ji)上(shang)清液，置于冰上(shang)以備(bei)后續實驗(yan)（或(huo)置于-80 ℃長期保存）。

血清樣品

一般建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣品(pin)至目標蛋白(bai)終濃(nong)度為 50~150 µg/mL，置于冰上(shang)備(bei)用（或(huo)置于-20 ℃長期保存）。

免疫復合物的制備

【注】：樣品所需(xu)的量和(he)孵(fu)育時間均(jun)依賴于每個特(te)定的抗體-抗原體系，因而可能需(xu)要優(you)化才能得(de)到最大產量。

以下實驗(yan)方案針對(dui) 2-10μg 親(qin)和純(chun)化的抗體，根據需要可以按比(bi)例放大。

1.在離心管中，將(jiang)每(mei)個樣品的細胞裂解液(ye)與 2-10μg 免疫沉(chen)淀(dian)抗體結合(he)。每(mei)個免疫沉(chen)淀(dian)反應(ying)推薦的總蛋白(bai)量為 500-1500μg。

2.用(yong) IP Lysis/Wash Buffer 將(jiang)抗體以及制(zhi)備(bei)好的樣品稀釋至 300-500μL。

3.在室溫(wen)下孵育(yu) 1-2 h，或 4 ℃過夜，以形成免疫(yi)復合物。

免疫沉淀

【注】：為保(bao)證磁珠(zhu)均勻分布，使用前通(tong)過反(fan)復顛倒或輕微渦(wo)旋混勻瓶中(zhong)磁珠(zhu)。

1.將 25µL(0.25 mg)的(de) Anti-Flag Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離(li)心管中(zhong)。

2.向磁珠中加入 500 µL 預冷 PBS，輕柔混勻。

3.將離心管(guan)放入磁力架(jia)中(zhong)收集磁珠到離心管(guan)的(de)一邊。去除上(shang)清。

4.向離心管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒離心管數次或輕微渦旋混勻(yun) 1min。用磁力架收集磁珠。去除上清。

5.將抗原樣品/抗體(ti)混(hun)合物加入(ru)裝有磁珠(zhu)的(de)離心管中，保持混(hun)勻(yun)室(shi)溫下孵(fu)育(yu) 1-2 h。

6.用(yong)磁力架收(shou)集磁珠，除去未結合的樣品，保存以備分析。

7.向離心管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔混勻。收集(ji)磁珠，棄上清(qing)。再(zai)重(zhong)復洗兩次。

8.變性洗(xi)脫：向離心管中加入(ru) 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置于(yu) 100℃水浴或者金(jin)屬(shu)浴中加熱 10 min。通過磁力架分離磁珠(zhu)，保留含有(you)目的抗原的上清。

【注】：如需(xu)保(bao)持蛋白活性(xing)，也可(ke)采用(yong)以下洗脫方式(shi)。

低 pH 洗脫：向離心管(guan)(guan)中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入 100 µL Elution Buffer。保持混勻在室溫下孵育離心管(guan)(guan) 5-10 min。通過磁力分離磁珠，保留含有目的抗(kang)原的上清。每 100 µL 洗出(chu)液中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)入 20 µ;L Neutralization Buffer 來(lai)中(zhong)(zhong)和低 pH。

注意事項

1.本產品僅限于(yu)科學實驗研究使用(yong)(yong)，不(bu)得用(yong)(yong)于(yu)臨(lin)床診斷(duan)、治療等領(ling)域。

2.請勿高速(su)離(li)心、干(gan)燥或冷(leng)凍磁(ci)珠，這(zhe)些操作會導致磁(ci)珠聚(ju)集而降(jiang)低結合能力。

3.IP 實驗中(zhong)不同類型的(de)抗體與抗原(yuan)結合(he)的(de)親(qin)和性是有區(qu)別的(de)，抗體與抗原(yuan)結合(he)還(huan)會受到 IP Lysis/Wash Buffer 的(de)影響，因此，如使用本(ben)實驗步驟不能獲(huo)得最佳的(de)實驗結果(guo)，可自行(xing)優化操作細節(jie)或者篩選及配(pei)制緩沖(chong)液進行(xing)實驗，推薦(jian)使用李記生(sheng)物(wu)的(de)相關產品，參照相關產品推薦(jian)。

4.微球(qiu)使用前應充分振蕩(dang)均(jun)勻(yun)。微球(qiu)應保存在儲存溶(rong)液中(zhong)，防止干燥。

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