1.具有高效(xiao)的蛋(dan)白結合能力。

2.超低(di)非特異性吸附的性能。

3.配合磁(ci)力(li)架操作(zuo)省時、簡便(bian)、溫和。

4.產品穩定性高。

訂購信息

常溫運輸。4℃保存，有效期 24 個月。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培(pei)養基，用(yong) PBS 洗(xi)細胞兩次。

2.收集(ji)細胞至 1.5 mL EP 管(guan)內，按比例(li)加入 IP Lysis/Wash Buffer，同時加入 PMSF 等相應(ying)的抑制劑(ji)，混勻(yun)后置于(yu)冰(bing)上靜置 5-20 min（期間混勻(yun)幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離心收集上清液，置(zhi)(zhi)于(yu)冰上以備后續實驗（或置(zhi)(zhi)于(yu)-80 ℃長期保存）。

表 1.培養皿 IP Lysis/Wash Buffer 推薦使用體積

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收集細(xi)胞，棄上清。

2.用 PBS 洗(xi)細(xi)胞(bao)一次，即用 PBS 將細(xi)胞(bao)團(tuan)重(zhong)懸，4℃、500-1000 g、10 min，收集細(xi)胞(bao)，棄(qi)上清。

3.用預冷(leng)的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細胞(bao)。每 50mg 細胞(bao)使用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入(ru) PMSF 等相應(ying)的抑制劑，混勻后(hou)置于(yu)冰(bing)上靜置 5-20 min（期間混勻幾次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集(ji)上(shang)清液，置于冰上(shang)以備后(hou)續實驗（或(huo)置于-80 ℃長期(qi)保存）。

血清樣品

一般建(jian)議建(jian)議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血(xue)清樣品(pin)至目標(biao)蛋白終濃度(du)為 50~150 µg/mL，置(zhi)于冰上備用（或置(zhi)于-20 ℃長期保存）。

免疫復合物的制備

【注】：樣品(pin)所需的(de)(de)量和孵育時間均依(yi)賴于每個特定的(de)(de)抗體-抗原體系(xi)，因而(er)可能(neng)需要優(you)化才(cai)能(neng)得到(dao)最(zui)大產量。

以(yi)下實驗方(fang)案(an)針對(dui) 2-10μg 親和純化的抗體，根據需(xu)要可以(yi)按比(bi)例放大。

1.在(zai)離(li)心管中，將每(mei)個(ge)樣品的(de)細胞裂解液與(yu) 2-10μg 免(mian)疫(yi)沉淀抗體結合。每(mei)個(ge)免(mian)疫(yi)沉淀反應推薦的(de)總(zong)蛋白量為 500-1500μg。

2.用 IP Lysis/Wash Buffer 將抗體(ti)以及(ji)制備好的樣(yang)品稀釋(shi)至 300-500μL。

3.在室(shi)溫下孵育 1-2 h，或 4 ℃過夜(ye)，以(yi)形成免疫復合物。

免疫沉淀

【注】：為保證磁珠均(jun)勻分布，使(shi)用前通過反復顛倒(dao)或輕微渦旋(xuan)混(hun)勻瓶中磁珠。

1.將 25µL(0.25 mg)的 Anti-Myc Magnetic Beads 加入 1.5 mL 離心(xin)管中(zhong)。

2.向磁珠中加入 500 µL 預冷 PBS，輕柔混勻。

3.將離(li)心管放入磁(ci)力(li)架中(zhong)收集磁(ci)珠到離(li)心管的一邊。去除上清(qing)。

4.向離(li)心管中加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛倒(dao)離(li)心管數(shu)次或輕(qing)微渦旋(xuan)混勻 1min。用磁(ci)力架

收集磁珠(zhu)。去(qu)除(chu)上清。

5.將抗(kang)(kang)原(yuan)樣品(pin)/抗(kang)(kang)體(ti)混(hun)合物(wu)加入裝有磁珠的離心管中(zhong)，保持混(hun)勻室溫(wen)下孵育 1-2 h。

6.用(yong)磁力架收集磁珠，除去未結合(he)的樣(yang)品，保存(cun)以備分析。

7.向離心管中(zhong)加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔(rou)混勻。收集磁珠，棄上清。再重(zhong)復洗兩次。

8.變性洗脫(tuo)：向(xiang)離(li)心管中加入 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將(jiang)樣品置于(yu) 100℃水(shui)浴或者金(jin)屬浴中加熱 10 min。通(tong)過磁力架分離(li)磁珠，保留(liu)含有目的抗原的上(shang)清。

【注】：如需保持蛋白活性，也(ye)可采(cai)用以(yi)下洗脫方式(shi)。

低(di) pH 洗(xi)脫：向(xiang)離(li)(li)心管中(zhong)(zhong)加入(ru) 100 µL Elution Buffer。保(bao)(bao)持混(hun)勻(yun)在室溫下(xia)孵育離(li)(li)心管 5-10 min。通過磁力(li)分離(li)(li)磁珠，保(bao)(bao)留含(han)有目的(de)抗原的(de)上清。每(mei) 100 µL 洗(xi)出液中(zhong)(zhong)加入(ru) 20 µL Neutralization Buffer 來中(zhong)(zhong)和低(di) pH。

注意事項

1.本產(chan)品僅限于科學實驗研究(jiu)使用，不(bu)得用于臨(lin)床診斷、治療等領域。

2.請勿高速離心、干燥或(huo)冷凍磁(ci)珠，這些(xie)操(cao)作會導致磁(ci)珠聚集(ji)而降低結合(he)能力。

3.IP 實驗(yan)(yan)中不(bu)同類型的(de)抗(kang)體與(yu)抗(kang)原(yuan)結(jie)合的(de)親(qin)和性是(shi)有區別的(de)，抗(kang)體與(yu)抗(kang)原(yuan)結(jie)合還會受到 IP Lysis/WashBuffer 的(de)影響，因此，如(ru)使用本實驗(yan)(yan)步驟不(bu)能獲得最佳(jia)的(de)實驗(yan)(yan)結(jie)果，可(ke)自(zi)行優化(hua)操(cao)作(zuo)細節或(huo)者篩選及配(pei)制(zhi)緩沖液進行實驗(yan)(yan)，推(tui)薦使用李記生物的(de)相關產品，參照相關產品推(tui)薦。

4.微球使用前(qian)應充分振(zhen)蕩均勻。微球應保存在儲存溶液中，防止(zhi)干燥。

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