Anti-HA免疫磁珠將(jiang)高質量的(de)(de)鼠源單克(ke)隆Anti-HA抗體共價(jia)偶聯在超順(shun)磁(ci)性(xing)納米(mi)微球表面,可特異(yi)性(xing)地與動植物或(huo)微生物裂解液(ye)、血(xue)清、腹水等中含(han)有 HA 標簽的(de)(de)蛋(dan)白結合，從(cong)而用于(yu)帶有 HA 標簽的(de)(de)融合蛋(dan)白或(huo)其蛋(dan)白復合物的(de)(de)免疫沉淀(dian)(Immunoprecipitation, IP)、免疫共沉淀(dian)(Co-IP)或(huo)純化。

Anti-HA Magnetic Beads (Anti-HA 磁(ci)珠)，可(ke)以(yi)特異性(xing)地結合(he) HA 標簽融合(he)蛋(dan)白，并可(ke)以(yi)借助磁(ci)力架等(deng)磁(ci)分(fen)離設備非常(chang)便捷地應用于帶有 HA 標簽的(de)融合(he)蛋(dan)白或其蛋(dan)白復合(he)物的(de)免疫沉(chen)淀或純化等(deng)實驗(yan)。

產品優勢

1.具(ju)有高效(xiao)的蛋白結合能(neng)力(li)。

2.超低非特異(yi)性(xing)吸(xi)附的性(xing)能。

3.配合磁(ci)力架操作省時、簡便、溫和(he)。

4.產品穩定性高。

訂(ding)購信(xin)息

常溫(wen)運輸。4℃保存(cun)，有(you)效(xiao)期 24 個(ge)月(yue)。

技術參數

貼壁細胞樣品

1.移去培養基(ji)，用 PBS 洗細胞(bao)兩次。

2.收(shou)集(ji)細(xi)胞至(zhi) 1.5 mL EP 管內，按比例加入 IP Lysis/Wash Buffer，同時加入 PMSF 等相應的抑(yi)制劑(ji)，混勻(yun)后(hou)置于冰上(shang)靜(jing)置 5-20 min（期間混勻(yun)幾次）。

3.4 ℃, 12000-16000 g,10 min 離(li)心收(shou)集(ji)上清液，置(zhi)于冰上以(yi)備后續(xu)實驗（或置(zhi)于-80 ℃長期保(bao)存）。

表 1.培養皿(min) IP Lysis/Wash Buffer 推薦使(shi)用體積(ji)

懸浮細胞樣品

1.4℃、500-1000 g、10 min，收(shou)集細胞(bao)，棄(qi)上清。

2.用(yong) PBS 洗細(xi)胞(bao)(bao)一(yi)次，即用(yong) PBS 將(jiang)細(xi)胞(bao)(bao)團重懸(xuan)，4℃、500-1000 g、10 min，收集(ji)細(xi)胞(bao)(bao)，棄上清(qing)。

3.用預冷的 IP Lysis/Wash Buffer 重懸細(xi)胞。每 50mg 細(xi)胞使(shi)用 500μL IP Lysis/Wash Buffer。同時加入 PMSF 等相(xiang)應(ying)的抑制(zhi)劑，混勻后置于冰上靜置 5-20 min（期間(jian)混勻幾(ji)次）。

4.4 ℃, 12000 -16000 g,10 min 離心收集(ji)上清液，置于(yu)冰上以備后續實驗（或置于(yu)-80 ℃長(chang)期保存(cun)）。

血清樣品

一(yi)般建議建議用 IP Lysis/Wash Buffer 稀釋血清樣品至目標蛋白(bai)終濃(nong)度為 50~150 µg/mL，置于(yu)冰(bing)上備用（或置于(yu)-20 ℃長期保存(cun)）。

免疫復合物的制備

【注】：樣品所需(xu)的(de)量和(he)孵育(yu)時間均依賴于每(mei)個特(te)定(ding)的(de)抗體(ti)-抗原體(ti)系，因而(er)可能(neng)(neng)需(xu)要優(you)化(hua)才能(neng)(neng)得(de)到最大(da)產量。

以下(xia)實(shi)驗方案(an)針對(dui) 2-10μg 親和純化的抗體，根(gen)據(ju)需要可(ke)以按比例(li)放大。

1.在離心管中(zhong)，將(jiang)每個樣品的細(xi)胞(bao)裂解液(ye)與 2-10μg 免疫沉淀(dian)抗(kang)體結(jie)合。每個免疫沉淀(dian)反應推薦(jian)的總蛋白量為 500-1500μg。

2.用(yong) IP Lysis/Wash Buffer 將抗(kang)體以(yi)及(ji)制備好的樣品稀釋至 300-500μL。

3.在(zai)室溫下孵育 1-2 h，或 4 ℃過夜，以形成免(mian)疫復合物。

免疫沉淀

【注】：為保證磁(ci)珠均勻分(fen)布，使用前通過反復顛倒或輕微渦旋混(hun)勻瓶中磁(ci)珠。

1.將(jiang) 25µL(0.25 mg)的 Anti-HA Magnetic Beads 加(jia)入 1.5 mL 離心管中。

2.向磁珠(zhu)中(zhong)加入 500 µL 預冷 PBS，輕柔混(hun)勻(yun)。

3.將離心管(guan)放入磁力架中收集(ji)磁珠到離心管(guan)的一邊。去除上(shang)清。

4.向離(li)心(xin)管(guan)中(zhong)加入 200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。顛(dian)倒離(li)心(xin)管(guan)數(shu)次或輕微渦旋混勻(yun) 1min。用磁力架(jia)收(shou)集磁珠。去除上清。

5.將抗(kang)原樣品/抗(kang)體混(hun)合(he)物加入裝有磁珠(zhu)的離(li)心管中，保持混(hun)勻室溫(wen)下(xia)孵(fu)育 1-2 h。

6.用磁力(li)架收集磁珠，除去(qu)未結合(he)的樣品(pin)，保存以備分析。

7.向離心(xin)管中加入 500 µL IP Lysis/Wash Buffer，輕柔(rou)混勻(yun)。收集磁珠，棄(qi)上(shang)清。再重復洗兩次。

8.變性(xing)洗脫：向離心(xin)管中加(jia)入(ru) 80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），將樣品置于 100℃水浴或(huo)者金屬浴中加(jia)熱 10 min。通(tong)過磁力架分離磁珠(zhu)，保留含有目的抗原的上清。

【注】：如需保(bao)持(chi)蛋白活性(xing)，也可采用(yong)以下洗脫方式(shi)。

低 pH 洗脫：向(xiang)離心管(guan)中(zhong)加(jia)入 100 µL Elution Buffer。保(bao)持混勻在室溫(wen)下(xia)孵育(yu)離心管(guan) 5-10 min。通過磁力分離磁珠，保(bao)留含有目的抗原的上清。每 100 µL 洗出液(ye)中(zhong)加(jia)入 20 µL Neutralization Buffer 來中(zhong)和低 pH。

注意事項

1.本產(chan)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨(lin)床(chuang)診斷、治療等(deng)領域。

2.請(qing)勿高速離心、干燥(zao)或冷凍磁珠(zhu)，這些操作會導致磁珠(zhu)聚集而(er)降低結(jie)合能力。

3.IP 實(shi)驗中不同類(lei)型的抗體與(yu)(yu)抗原(yuan)結合的親和性是有區別的，抗體與(yu)(yu)抗原(yuan)結合還(huan)會受到 IP Lysis/WashBuffer 的影(ying)響，因此，如使(shi)用(yong)本實(shi)驗步驟不能獲得最佳(jia)的實(shi)驗結果，可自行優化操作(zuo)細節或者篩選及(ji)配制(zhi)緩(huan)沖液進(jin)行實(shi)驗，推薦使(shi)用(yong)李記(ji)生(sheng)物(wu)的相關產品，參照相關產品推薦。

4.微球(qiu)使用前應(ying)充分振蕩均(jun)勻。微球(qiu)應(ying)保存(cun)在儲存(cun)溶液(ye)中，防止干燥。

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