嘌呤霉素 (Puromycin Dihydrochloride)是來源于Streptomyces alboniger的一種氨基核苷類抗生素，中文名為嘌呤霉素，常用于篩選通過質粒轉染/轉化、病毒感染等方法能表達pac基因(puror)的真核或原核多克隆或單克隆細胞。Puromycin不僅用于穩定細(xi)胞株的(de)篩選(xuan)，也(ye)用于穩定細(xi)胞株的(de)維持。本產品的(de)10mg/ml包(bao)裝經過(guo)濾除(chu)菌，可以直接用于細(xi)胞培養。

Puromycin的特點是快速作用于細(xi)胞，一(yi)般(ban)2 d內可(ke)以殺死(si)99%的不表達pac基因的細(xi)胞。

在革(ge)蘭氏陽性菌、動物(wu)(wu)或(huo)昆蟲細胞中(zhong)，嘌(piao)呤霉(mei)(mei)素通(tong)過抑制(zhi)蛋白(bai)質合(he)成而(er)抑制(zhi)或(huo)殺死(si)細胞。其作用機(ji)制(zhi)為嘌(piao)呤霉(mei)(mei)素是氨酰-tRNA分子(zi)3’末(mo)端(duan)的(de)(de)類(lei)似物(wu)(wu)，能夠與(yu)核糖(tang)體的(de)(de)A位點結合(he)并摻入到延伸的(de)(de)肽鏈中(zhong)。嘌(piao)呤霉(mei)(mei)素與(yu)A位點結合(he)后，不會參與(yu)隨(sui)后的(de)(de)任何反應，從而(er)導(dao)致蛋白(bai)質合(he)成的(de)(de)提前終止并釋放(fang)出(chu)C-末(mo)端(duan)含有嘌(piao)呤霉(mei)(mei)素的(de)(de)不成熟(shu)多(duo)肽。

Pac基因(yin)(yin)表(biao)達嘌(piao)呤霉素N-乙酰轉移酶(mei)(Puromycin N-acetyl-tranferase)，該基因(yin)(yin)是在Streptomyces alboniger中發現的(de)(de)。如果(guo)表(biao)達基因(yin)(yin)，就會對嘌(piao)呤霉素產生抗性，這一特(te)性目前普遍應用(yong)于(yu)篩選表(biao)達pac基因(yin)(yin)的(de)(de)哺乳動物穩定細胞(bao)株(zhu)等(deng)(deng)。例如，很(hen)多商業化的(de)(de)慢(man)病毒載體都攜帶pac基因(yin)(yin)(一般在質粒圖譜上標記(ji)為puror)，從而利用(yong)嘌(piao)呤霉素篩選特(te)定基因(yin)(yin)的(de)(de)穩定表(biao)達細胞(bao)株(zhu)。嘌(piao)呤霉素也可以用(yong)來(lai)篩選表(biao)達pac基因(yin)(yin)的(de)(de)大腸桿菌(jun)菌(jun)株(zhu)、酵母菌(jun)株(zhu)等(deng)(deng)。

訂購信息

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技術參數

1.CAS：58-58-2
2.分(fen)子式：C22H29N7O5•2HCl

3.分子量：544.43

4.純度：>98%

5.結構式：

使用方法

1.推薦工作濃度：

推薦的作用于哺乳動物(wu)細胞的嘌呤(ling)霉素濃(nong)度(du)一般為1-10μg/ml，但最(zui)佳工(gong)作濃(nong)度(du)需(xu)要通(tong)過劑量反應曲線(xian)來(lai)確定(ding)。

表(biao)(biao)1. 部分常見哺乳動物細(xi)胞的推薦工作濃(nong)度表(biao)(biao)

2.嘌呤霉素劑量反應曲線的確定(以shRNA轉染或者慢病毒感染為例）
　　嘌呤霉素的有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝及細胞所處細胞周期等因素相關。為了篩選到穩定表達的shRNA或感染病毒的細胞株，確定殺死未轉染/感染細胞的zui低濃度嘌呤霉素非常重要。對于初次使用的細胞，一般需要通過實驗來確定適合自身實驗體系的劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)。
（1）第一天：24孔板中以5~8×104cells/孔的密度接種細胞，接種夠量的孔以便進行后續的劑量梯度實驗。細胞培養箱內培養過夜。
（2）第二天：在培養過夜后的細胞中更換新鮮配制的篩選培養基，該篩選培養基為含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養基(如0、1、2.5、5、7.5、10μg/ml等)，更換培養基后在細胞培養箱中繼續培養。
（3）第三天后：由于嘌呤霉素可以快速作用于細胞，一般2d內可以殺死99%的未表達pac基因的細胞，所以在加嘌呤霉素后的1-2 d就可以進行觀察細胞存活率，從而確定有效殺死正常細胞的藥物zui低濃度。如果細胞耐藥性比較強，需要每日觀察，一般4-10 d內即可確定嘌呤霉素的zui低濃度。
3. 哺乳動物穩定表達細胞株的篩選
轉染含有pac基因的質粒或者感染含有該基因的病毒后，即可篩選穩定表達株。
（1）細胞轉染或感染48 h后，將細胞置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養基中培養，此為處理組。
【注】：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用zui明顯。細胞過于密集，抗生素產生的效力會明顯下降，所以細胞的密度最好不超過25%。建議同時做一個正常細胞的對照組。轉染或感染48 h后，如果細胞過密也可以消化后重新接種細胞，培養過夜后即可進行嘌呤霉素篩選。
（2）每隔2-3 d，更換含有嘌呤霉素的培養基。
（3）篩選7 d后，對照組正常細胞應該100%死亡，處理組中存活的細胞為表達pac基因的細胞。然后根據實驗目的進行多克隆或單克隆細胞的篩選。
【注】：每日進行細胞生長狀態的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要24 h，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在2-10 d。
（4）待細胞可以穩(wen)定生長后，嘌(piao)呤(ling)(ling)(ling)霉(mei)(mei)素(su)的濃度可以減半用于后續(xu)的培養(yang)。在(zai)得到穩(wen)定表達細胞株(zhu)后，一般建議嘌(piao)呤(ling)(ling)(ling)霉(mei)(mei)素(su)也須持續(xu)加(jia)入(ru)，并(bing)2-3 d更(geng)換含(han)有嘌(piao)呤(ling)(ling)(ling)霉(mei)(mei)素(su)的新鮮培養(yang)液(ye)。

注意事項

1.本產品(pin)僅限于科(ke)學(xue)實驗研(yan)究使用，不得用于臨床診斷、治(zhi)療等領域。

2.用于(yu)細胞實(shi)驗，溶(rong)解后，須用一(yi)次性(xing)針(zhen)頭濾器過濾除菌。

3.抗生素不穩(wen)定，請(qing)在有(you)效期內盡(jin)快(kuai)使用。

4.以(yi)上數(shu)據均來自(zi)公開(kai)文獻，和元李記(ji)暫未本(ben)產品進行獨立驗證(zheng)，僅供參考。