AB11L234-G418（遺傳霉素），也(ye)稱作Geneticin (遺傳霉(mei)素(su))、G418、G 418或者(zhe)G-418，是一種(zhong)結(jie)構類(lei)(lei)似(si)于(yu)慶(qing)大霉(mei)素(su)B1(Gentamycin B1)的氨基(ji)糖苷類(lei)(lei)抗生素(su)，來源(yuan)于(yu)Micromonospora rhodorangea，常用于(yu)篩(shai)選表達neo基(ji)因的真核(he)或原核(he)多克隆或單克隆細胞(bao)。

G418不僅用于穩定細胞株的篩選，也用于穩定細胞株的維持。本產品的50mg/ml包裝經過過濾除菌，可以直接用于細胞培養。

在細(xi)菌、酵母、原(yuan)生動(dong)物(wu)、蠕蟲、高(gao)等(deng)植(zhi)物(wu)和(he)哺乳(ru)動(dong)物(wu)中(zhong)，遺傳霉素(su)通過抑(yi)制蛋白(bai)合成(cheng)而(er)抑(yi)制或殺死(si)細(xi)胞(bao)(bao)。其作(zuo)用機制為遺傳霉素(su)能夠與70S和(he)80S核糖體結合，從而(er)阻(zu)斷肽鏈延伸，干擾蛋白(bai)合成(cheng)。其抗性基因(主(zhu)要為neo基因)位于轉(zhuan)(zhuan)座子Tn601 (903)或Tn5(來源于細(xi)菌)，可以(yi)在真(zhen)核細(xi)胞(bao)(bao)中(zhong)表達。通過基因重組技(ji)術將這些抗性基因導入細(xi)胞(bao)(bao)，使細(xi)胞(bao)(bao)表達抗性產物(wu)氨基糖苷(gan)磷酸轉(zhuan)(zhuan)移(yi)酶(amino-glycoside 3’-phosphotransferase, APH(3)II)，從而(er)獲得對G418的耐藥性，用來篩選(xuan)和(he)維持培養攜帶(dai)抗性基因的原(yuan)核或者真(zhen)核細(xi)胞(bao)(bao)。

哺乳動物(wu)細(xi)胞(bao)中，當抗(kang)性(xing)基(ji)因(yin)neo被整合進真(zhen)核細(xi)胞(bao)基(ji)因(yin)組后(hou) ,編碼(ma)表達(da)氨基(ji)糖(tang)苷磷酸轉移(yi)酶(amino-glycoside 3’-phosphotransferase, APH(3)II)。此酶通過共價修(xiu)飾G418的氨基(ji)或羥基(ji)功(gong)能(neng)，抑制抗(kang)生素-核糖(tang)體(ti)間(jian)的相(xiang)互作(zuo)用，從(cong)而使得(de)抗(kang)生素失活。這(zhe)一特性(xing)賦予(yu)細(xi)胞(bao)產生抗(kang)性(xing)而能(neng)在(zai)含有G418的選(xuan)擇性(xing)培養(yang)基(ji)中生長。進行穩(wen)轉細(xi)胞(bao)株(zhu)篩選(xuan)實驗時，需要建立(li)劑量反應(ying)曲(qu)線(dose-response curve or kill curve)確定(ding)殺死(si)無抗(kang)性(xing)細(xi)胞(bao)的zui低(di)有效濃度。

植物細胞中，通過轉染攜帶nptII基因的抗(kang)(kang)性(xing)(xing)質粒孵育其抗(kang)(kang)性(xing)(xing)。nptII基因也能編碼表達(da)氨(an)基糖(tang)苷磷酸轉移酶，這個(ge)酶使(shi)得多(duo)種抗(kang)(kang)生素喪失活性(xing)(xing)，包括(kuo) G418，卡(ka)那(nei)霉素和巴龍霉素。

G 418與新霉素(su)同為氨(an)基(ji)糖苷類抗生素(su)，都(dou)(dou)可(ke)被Neo基(ji)因(yin)(yin)產物失活(huo)，因(yin)(yin)此(ci)都(dou)(dou)可(ke)以用于篩(shai)選(xuan)攜帶Neo抗性基(ji)因(yin)(yin)的(de)細(xi)胞，新霉素(su)篩(shai)選(xuan)的(de)細(xi)胞都(dou)(dou)可(ke)以用G418替(ti)代。

訂購信息

常溫運輸(shu)。4℃保存(cun)，有效期36個月(yue)。

技術參數

1.CAS：108321-42-2

2.分子式：C20H40N4O10·2H2SO4  

4.分子量：692.71

5.純度：~98%
6.結構式：

AB11L234-G418（遺傳霉素）使用方法

1.G418儲存液的配制(50mg/ml，活性濃度)
（1）活力單位的換算
　　根據此公式進行換算：(1000/A0)×A1=A2，其中A0是G418的活力值(Potency)，因批次而異，具體見瓶子的標簽。A1是想配制的活性G418濃度。A2是實際稱重的粉末與體積比濃度。
　　比如若所用批次的G418 活力值為：750µg/mg，要配制50mg/ml的G418活性濃度，則實際要配制的粉末濃度為1000/750×50mg/ml=66.33mg/ml。
　　如果配制10ml的G418儲存液(活性濃度，50mg/ml)，則需要稱取663.3mg粉末。
（2）除菌和保存
　　根據上述換算得到的實際粉末稱重量，加入10ml無菌去離子水使其*溶解。
　　先用5ml無菌去離子水預濕潤0.22μm針頭式過濾器，除盡水。之后使用此濾器過濾，除菌后分裝成單次使用的小量(如1ml)放到-20℃凍存，1年穩定。
【注】：不要對混濁的溶液進行過濾，因為混濁的溶液意味著藥物未*溶解，過濾過程中會造成藥物損失，降低活性；不建議使用液體培養基，NaCl，磷酸鹽溶液或者有機溶劑來制備儲存液；配制G418溶液時，一定要根據相應批次G418標注的活力值(potency)來進行換算，從而得到需要活性濃度的儲存液以及工作液。
2.建議使用濃度
　　一般來說，剛開始篩選轉化子需要高濃度的G418，并用一個較低濃度的G418維持培養。生長條件，細胞類型和其它的環境因素都可能影響G418的用量，因此第一次使用的實驗體系建議通過劑量反應性曲線(dose-response curve or kill curve)，來確定最佳篩選濃度。
　　通常情(qing)況(kuang)，哺(bu)乳動物細(xi)胞(bao)篩(shai)選范圍200-2000μg/ml；植物細(xi)胞(bao)：10-100μg/ml；酵母細(xi)胞(bao)：500-1000μg/ml。

表1.部分哺乳動物細胞的(de)推薦工作濃度表。

3.遺傳霉素劑量反應曲線的建立
　　遺傳霉素的有效篩選濃度跟細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝及細胞所處細胞周期等因素相關。為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，確定能夠殺死未轉染宿主細胞的遺傳霉素zui低濃度非常重要，對于初次使用的細胞，一般需要通過實驗來確定適合自身實驗體系的劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)，曲線建立時至少應設置6個遺傳霉素濃度。遺傳霉素處理分裂期的細胞時活性*，因此在添加遺傳霉素之前需要先將細胞培養一段時間。
（1）第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜。
注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。
（2）根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定0、50、100、200、400、800、1000μg/ml。
（3）第二天：去除舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度遺傳霉素的培養基。每個濃度做三個平行孔。更換培養基后在細胞培養箱中繼續培養。
（4）接下來每3-4 d更換新的含藥物培養基。
（5）按照固定的周期(如每2 d)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10 d)內能夠殺死絕大多數細胞的zui低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
4.穩定轉染細胞株的篩選
（1）細胞轉染48h后，將細胞置于含有適當濃度遺傳霉素的新鮮培養基中培養，此為處理組。
（2）【注】：當細胞處(chu)于分裂活躍期時(shi)，抗生素(su)作(zuo)用zui明顯(xian)。當細胞過(guo)于密集(ji)，抗生素(su)產生的(de)(de)效(xiao)力會明顯(xian)下降，所以細胞的(de)(de)密度最好不超過(guo)25%。建議(yi)同時(shi)做一個正常(chang)細胞的(de)(de)對照組。轉(zhuan)染(ran)或感(gan)染(ran)48 h后，如果細胞過(guo)密也可(ke)以消化后重新接種細胞，培養過(guo)夜后即可(ke)進行(xing)遺(yi)(yi)傳霉素(su)篩選。每隔3-4 d更換(huan)含有遺(yi)(yi)傳霉素(su)的(de)(de)培養液。

（3）篩選7 d后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。對照組正常細胞應該100%死亡，處理組中存活的細胞為表達neo基因的細胞。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率不同，集落的形成可能需要一周或者更多的時間。
（4）克隆形成后，挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7 d。
（5）之后(hou)更換正常培養基培養即可。

注意事項

1.本(ben)產(chan)品僅限(xian)于科(ke)學實驗研究使(shi)用，不(bu)得用于臨床診斷、治療等(deng)領(ling)域。

2.用于細胞實驗，溶解后(hou)，須用一(yi)次性針(zhen)頭濾器(qi)過濾除菌。

3.本產品不(bu)可高壓滅菌。

4.G418不要(yao)和(he)其(qi)(qi)它抗生(sheng)(sheng)素/抗真菌劑(如青霉素/鏈霉素)共同使用，因為它們是G418的(de)競爭性抑制劑。其(qi)(qi)它的(de)抗生(sheng)(sheng)素也會(hui)產生(sheng)(sheng)交叉(cha)活性。

5.G418加入(ru)培(pei)養(yang)體系中，未轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)的細(xi)胞(bao)(bao)有(you)可能不會被(bei)殺死，原因在于藥物濃度過低，或者細(xi)胞(bao)(bao)密度過高。另外，快速分裂的細(xi)胞(bao)(bao)相對于緩慢增殖細(xi)胞(bao)(bao)，更容易被(bei)殺死。對照(zhao)細(xi)胞(bao)(bao)(未轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran))可能在添加抗(kang)生素5-7 d后才能被(bei)殺死，轉(zhuan)(zhuan)染(ran)(ran)細(xi)胞(bao)(bao)(抗(kang)性克(ke)隆子)的克(ke)隆需要10-14 d形成。

6.即使加入(ru)有效劑量的(de)G418，細胞可能(neng)會繼續分裂2-3次。G418的(de)藥效通常在2 d后才變得明顯。

7.本產品可能對人體有一定(ding)的毒害作用，請注(zhu)意適當防(fang)護，以(yi)避免(mian)直(zhi)接(jie)接(jie)觸人體或吸入體內。

8.為了您(nin)的安全和健康，請穿實(shi)驗服并(bing)戴一次性手套操作。

9.抗生素不穩(wen)定(ding)，請在有效期內盡快使用。

10.以(yi)上數據(ju)均來自公開(kai)文獻, 李記生物暫未本(ben)產品進行(xing)獨立驗證, 僅供參(can)考。

相關產品推薦

Puromycin Dihydrochloride (嘌呤霉素)（貨號：AB11L241）