Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是(shi)來源于(yu)灰色(se)鏈霉菌(jun)(Streptomyces griseochromogenes)的(de)一種核苷類抗生(sheng)素(su)，中文(wen)名為滅瘟素(su)S、殺稻瘟菌(jun)素(su)S或稻瘟散，一般為鹽酸鹽。

Blasticidin S常(chang)(chang)用(yong)于篩選(xuan)攜(xie)帶bsr/BSD/bls基因(yin)(常(chang)(chang)標記為bsrr/bsdr/Blastr)質粒(li)的(de)哺(bu)乳動物穩定(ding)轉染細(xi)胞(bao)(bao)株(zhu)，具有快速而強(qiang)效的(de)作用(yong)模式，很低(di)的(de)抗(kang)生素濃度便(bian)能(neng)使未攜(xie)帶抗(kang)性(xing)基因(yin)的(de)細(xi)胞(bao)(bao)迅速死亡。

本產品10mg/ml包裝配制在HEPES (pH7.4)緩沖溶液(ye)中，濃度(du)為(wei)10mg/ml，經0.22μm濾膜過濾除(chu)菌，可以直接用于(yu)細胞培養(yang)。本產品10mg和50mg包裝為(wei)粉(fen)末裝。

Blasticidin S通過干擾(rao)核(he)糖(tang)體結合肽(tai)段而特異性(xing)抑制原核(he)細(xi)胞(bao)(bao)或真核(he)細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)蛋白(bai)合成。目前已經有3種滅瘟素耐受基(ji)(ji)因，一種是(shi)分(fen)離自鏈(lian)霉菌(Streptoverticillum sp.)的(de)(de)(de)乙(yi)酰(xian)基(ji)(ji)轉移酶基(ji)(ji)因bls；另外兩種是(shi)脫(tuo)氨酶基(ji)(ji)因，分(fen)別是(shi)從蠟狀芽孢桿(gan)菌(Bacillus cereus)中分(fen)離的(de)(de)(de)bsr和從土霉菌(Aspergillus terreus)中分(fen)離的(de)(de)(de)BSD基(ji)(ji)因。bsr和BSD基(ji)(ji)因是(shi)zui常用(yong)的(de)(de)(de)篩選標志，用(yong)于(yu)哺乳動物(wu)和植物(wu)細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)穩定(ding)細(xi)胞(bao)(bao)株篩選。Blasticidin S也可用(yong)于(yu)大腸桿(gan)菌(E. coli)等原核(he)細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)(de)篩選。

Blasticidin S具有(you)快(kuai)速而強效的(de)作用模(mo)式，在很低(di)的(de)抗(kang)生素濃(nong)度下便能導致細(xi)(xi)胞(bao)(bao)快(kuai)速死亡(wang)(wang)。大(da)腸桿菌通常對(dui)50μg/ml的(de)濃(nong)度敏感，而哺乳動(dong)物細(xi)(xi)胞(bao)(bao)對(dui)低(di)至(zhi)2-10µg/ml的(de)濃(nong)度敏感。細(xi)(xi)胞(bao)(bao)死亡(wang)(wang)迅速發生，通常可在不到一(yi)周(zhou)的(de)時(shi)間內(nei)即可形成具有(you)Blasticidin S抗(kang)性的(de)穩(wen)定哺乳動(dong)物細(xi)(xi)胞(bao)(bao)系。

訂購信息

常溫運輸。4℃保存，有(you)效期36個月。

技術參數

1.CAS：3513-03-9

2.分(fen)子式(shi)：C17H26N8O5·HCl

3.分(fen)子(zi)量：458.9

4.純度：>95%

5.結構式：

使用方法

1.推薦工作濃度

推薦的作(zuo)用于哺乳動物細(xi)胞的Blasticidin S濃度一般為1-50μg/ml，但最佳工作(zuo)濃度需(xu)要通過劑量(liang)反應(ying)曲線來確定。

表(biao)1.部分(fen)常見哺乳動物(wu)細(xi)胞的推薦工(gong)作濃度(du)表(biao)

2.Blasticidin S劑量反應曲線的確定
　　Blasticidin S的有效篩選濃度與細胞類型、生長狀態、細胞密度、細胞代謝及細胞所處細胞周期等因素相關。為了篩選到具有Blasticidin S抗性的穩定細胞株，需要確定殺死未轉染/感染宿主細胞所需的Blasticidin S的zui低濃度，可以通過實驗來確定適合自身實驗體系的劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)。
（1）第一天：將正常的細胞按照約25%的密度接種在適宜的細胞培養板上，于細胞培養箱內培養過夜。
（2）第二天：將培養過夜的細胞培養基換成新鮮的含不同濃度Blasticidin S的篩選用培養基，Blasticidin S濃度可以設置為0、2、4、6、8和10μg/ml等，每個濃度設置2個復孔，于細胞培養箱內繼續培養。注：也可以根據自己的實驗體系，設置不同的濃度梯度。
（3）每3-4 d更換新鮮的篩選培養基，并觀察存活細胞的比例。
（4）選擇在加入Blasticidin S后7-10天殺死大多數細胞的zui低濃度為最佳篩選濃度。
3.哺乳動物穩定表達細胞株的篩選
　　轉染含有bsr或BSD基因的質粒或者感染含有該基因的病毒后，即可篩選穩定表達株。
（1）細胞轉染或感染48h后，將細胞置于含有適當濃度Blasticidin S的新鮮培養基中培養，此為處理組。
【注】：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用zui明顯。細胞過于密集，抗生素產生的效力會明顯下降，所以細胞的密度最好不超過25%。建議同時做一個正常細胞的對照組。轉染或感染48 h后，如果細胞過密也可以消化后重新接種細胞，培養過夜后即可進行Blasticidin S篩選。
（2）每3-4 d去除培養基(ji)，加入含Blasticidin S的新鮮培養基(ji)。

（3）篩選7-10 d后，對照組正常細胞應該100%死亡，處理組中存活的細胞為表達bsr或BSD基因的細胞。然后根據實驗目的進行多克隆或單克隆細胞的篩選。根據宿主細胞種類和轉染/篩選效率，集落形成可能需要一周或更多的時間。
（4）克隆形成后，挑取并轉移5-10個(ge)抗性克隆到35mm細胞(bao)培(pei)養(yang)板中，加(jia)入選擇培(pei)養(yang)基維持培(pei)養(yang)7 d。隨(sui)后用細胞(bao)毒性實驗進行檢測。

注意事項

1.本(ben)產品僅限于科學實驗研究(jiu)使用(yong)，不得(de)用(yong)于臨床(chuang)診斷、治療(liao)等(deng)領域(yu)

2.用(yong)于細胞實驗，溶解后，須(xu)用(yong)一次性針頭濾(lv)器過濾(lv)除菌。

3.抗生素不穩定(ding)，請在有效期內盡快(kuai)使用。

4.以上數據(ju)均來自(zi)公開文獻, 李(li)記生物暫未本產品進行獨立驗證, 僅供參考。

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