BCA蛋(dan)白定量試劑盒

產品描(miao)述
BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法。基于雙縮脲反應，即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu⁺，Cu⁺與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，在562 nm處有高的吸光值，該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。測定其在562 nm處的吸光值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。該方法快速靈敏、穩定可靠且對不同種類蛋白質變異系數很小。試劑盒中提供了濃度穩定的蛋白標準品用于制作標準曲線。
BCA 蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)定量試劑盒可(ke)(ke)用于試管法(fa)檢(jian)(jian)測(ce)，也可(ke)(ke)用于微孔板(ban)法(fa)檢(jian)(jian)測(ce)。試管法(fa)需較大量蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)樣品(100 μL)和工(gong)作(zuo)液(ye)(2 mL)，蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)樣品與 BCA 工(gong)作(zuo)液(ye)的比率為1:20(v/v)，蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)測(ce)定范圍(wei)為20-2000 μg/mL，采(cai)用加強法(fa)可(ke)(ke)以檢(jian)(jian)測(ce)到(dao) 5 μg/mL；微孔板(ban)法(fa)操作(zuo)簡單(dan)方便，僅(jin)需少量(10-25 μL)的蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)樣品和工(gong)作(zuo)液(ye)(200 μL)，蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)樣品與工(gong)作(zuo)液(ye)的比率為1:20(v/v)或(huo)者1:8(v/v），蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)測(ce)定范圍(wei)為 20-2000 μg/mL，采(cai)用加強法(fa)可(ke)(ke)以檢(jian)(jian)測(ce)到(dao) 5 μg/mL。
我(wo)司提供的 BCA 蛋白濃度檢測試劑盒，比色皿法分別可做125次，酶標法可做1250次。
訂(ding)購信息

產品組分(fen)

運輸與保存
常(chang)溫運輸。常(chang)溫保存，有效(xiao)期12個月。
使用方法
一、配制標準品和工作(zuo)液

1. 配(pei)制 BSA 標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)體(ti)系(xi)（線性范圍(wei)20-2000 μg/mL或者5-250μg /mL標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)制備各2種配(pei)置方法，請根(gen)據習慣選用(yong)恰當方式）。【注】：BSA 標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)濃(nong)度為2 mg/mL，稀(xi)釋液(ye)為蛋(dan)白樣品(pin)的溶解(jie)液(ye)，原則上蛋(dan)白樣品(pin)在(zai)什么溶液(ye)中，標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)品(pin)也宜用(yong)什么溶液(ye)稀(xi)釋。但也可(ke)用(yong)水或 1 X PBS 進(jin)行稀(xi)釋。

BSA 標準品(pin)體系配制表（配制后可放置于4℃ 冰箱(xiang)多次(ci)使用）




表1.微(wei)孔(kong)板檢測BSA 標(biao)準(zhun)品體(ti)(ti)系配(pei)(pei)制（線性范圍 20-2000 μg/mL）配(pei)(pei)置方法一(yi)

表2.微孔(kong)板檢測BSA 標準品體(ti)系(xi)配制（線性范圍(wei) 20-2000 μg/mL）配置方法二

表(biao)3.BSA標(biao)準(zhun)品體系（微孔板檢測(ce)，線性范圍 5-250μg /mL）配置方法一(yi)

表4.BSA標準(zhun)品體系（微孔板檢測，線性范圍 5-250μg /mL）配(pei)置方(fang)法(fa)二(er)

2. 配制 BCA工作液
(1) 計算所(suo)需要(yao)的(de)總(zong)BCA 工(gong)作液(ye)體積。總(zong)BCA工(gong)作液(ye)體積=（標準品(pin)(pin)數(shu)(shu)量(liang)+待測(ce)樣品(pin)(pin)數(shu)(shu)量(liang)）x重(zhong)復數(shu)(shu)x每個樣品(pin)(pin)所(suo)需要(yao)的(de)BCA 工(gong)作液(ye)。【注】：試管法(fa)檢測(ce)時每個樣品(pin)(pin)加(jia) 2.0 mL BCA 工(gong)作液(ye)，微孔板(ban)檢測(ce)每個樣品(pin)(pin)加(jia)200 μL BCA 工(gong)作液(ye)。
(2) 配(pei)制BCA工作液：50 體(ti)積的BCA 試(shi)(shi)劑(ji) A 中加(jia)入1 體(ti)積的BCA 試(shi)(shi)劑(ji)B（A:B=50:1），充分混勻。【注】：BCA工作液裝入密封容器(qi)內，室溫條(tiao)件24h 穩定(ding)。

二(er)、檢測方法
1. 試管(guan)檢測方法（樣品:BCA工作(zuo)液=1:20）
(1) 各取100 μL 標準品(pin)和待測樣品(pin)加入到反(fan)應管中。
(2) 每管(guan)加入2.0 mL BCA 工作液(ye)，混勻(yun)。根(gen)據待(dai)測樣品的濃(nong)度(du)范圍選擇孵育時間(jian)和溫度(du)。
標(biao)準孵育方法：37℃ 孵育30 min 或(huo)者室(shi)溫2h（檢測范圍：20-2000 μg/mL）
增強孵育(yu)方法：60℃ 孵育(yu)30 min（檢測范圍：5-250 μg/mL）
【注】：BCA 檢(jian)測蛋(dan)白濃度，延長(chang)孵(fu)(fu)育(yu)時間會(hui)加深(shen)顏色(se)反應。升高溫度會(hui)加快顯色(se)反應，但是(shi)溫度升高和(he)時間延長(chang)會(hui)降低(di)檢(jian)測下限，以及(ji)降低(di)工作線性范圍。若蛋(dan)白濃度很低(di)，可在較高溫度孵(fu)(fu)育(yu)或者適當延長(chang)孵(fu)(fu)育(yu)時間。
(3) 冷(leng)卻到(dao)室溫。在分光(guang)光(guang)度(du)計(ji)上進(jin)行檢測，設定波(bo)長為 562 nm，在10 min內對所有(you)(you)樣品(pin)讀數。【注(zhu)】：由于BCA 反應達不到(dao)真(zhen)正的(de)反應終點，即使溫度(du)降低(di)(di)至室溫生色(se)(se)反應液會(hui)繼續。但(dan)是(shi)，由于室溫下生色(se)(se)比率(lv)相當低(di)(di)，因此若是(shi)10 min 內能(neng)對所有(you)(you)的(de)樣本進(jin)行 562 nm 吸光(guang)度(du)的(de)測試，不會(hui)導(dao)致(zhi)明顯錯誤。
(4) 根據BSA 標準品(pin)的吸(xi)光(guang)度(du)（減去標準品(pin)中空白孔的OD 值即最終的讀數(shu)(shu)），繪制標準曲線（X-蛋白濃度(du)μg/mL；Y-最終的OD 562nm）。依據標準曲線和樣品(pin)的稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)(shu)計算(suan)樣品(pin)蛋白濃度(du)。
2. 微孔板檢測方法（樣品: BCA工作液(ye)=1:20）
(1) 各取(qu)10 μL標(biao)準品(pin)和待測樣(yang)品(pin)加入到微孔板中。【注】：樣(yang)品(pin)與工作液比(bi)例為1:20，檢(jian)(jian)測范(fan)圍為125-2000 μg/mL。若樣(yang)品(pin)濃度非(fei)常低，可(ke)使用25μL 標(biao)準品(pin)和待檢(jian)(jian)測樣(yang)品(pin)進行檢(jian)(jian)測（即1:8），這(zhe)時試劑(ji)盒的檢(jian)(jian)測范(fan)圍為 20-2000 μg/mL。
(2) 每(mei)孔加入200 μL BCA 工作液，槍頭(tou)吹打充分混勻。蓋上微孔板，37℃ 孵育30 min。
(3) 冷卻到室溫，在酶標儀上的(de)562 nm 波長(chang)范圍(wei)處檢(jian)測吸光度。
(4) 根據(ju)BSA標準(zhun)品的(de)吸(xi)光度(du)（減去(qu)標準(zhun)品中空白孔(kong)的(de)OD值即最終(zhong)的(de)讀數），繪制標準(zhun)曲(qu)線(xian)（ X-蛋白濃度(du)μg/mL；Y-最終(zhong)的(de)OD 562nm）。依據(ju)標準(zhun)曲(qu)線(xian)和樣品的(de)稀(xi)釋(shi)倍數計算(suan)樣品蛋白濃度(du)。

注意(yi)事項

1. 本產(chan)品僅限于科學實驗研究(jiu)使用(yong)，不得(de)用(yong)于臨床診斷(duan)、治療等(deng)領域。

2. BCA兼(jian)容性(xing)詳(xiang)見官。

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