Caspase 1活細胞凋(diao)亡檢(jian)測(ce)試(shi)劑盒（綠色）

產品描述
　　活細胞凋亡檢測試劑(ji)(ji)盒基(ji)于(yu)半(ban)(ban)胱(guang)(guang)(guang)天(tian)(tian)冬(dong)(dong)酶(mei)的熒(ying)光(guang)抑制(zhi)劑(ji)(ji)。這些(xie)抑制(zhi)劑(ji)(ji)具有細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)滲(shen)透性和非細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)毒性。一旦進(jin)入(ru)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)，半(ban)(ban)胱(guang)(guang)(guang)天(tian)(tian)冬(dong)(dong)酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)(ji)與(yu)活(huo)性半(ban)(ban)胱(guang)(guang)(guang)天(tian)(tian)冬(dong)(dong)酶(mei)共價結合(he)。 Caspase-1主要參與(yu)促炎(yan)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)因子的激活(huo)和細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)凋亡過程。已經證明(ming)胱(guang)(guang)(guang)天(tian)(tian)蛋白酶(mei)1對(dui)肽序列(lie)Tyr-Val-Ala-Asp（YVAD）具有底物選擇(ze)性。該試劑(ji)(ji)盒使用FAM-YVAD-FMK作為半(ban)(ban)胱(guang)(guang)(guang)天(tian)(tian)冬(dong)(dong)酶(mei)1活(huo)性的熒(ying)光(guang)指示劑(ji)(ji)。 FAM-YVAD-FMK在凋亡細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)中不可逆地結合(he)活(huo)化的半(ban)(ban)胱(guang)(guang)(guang)天(tian)(tian)冬(dong)(dong)酶(mei)1。一旦與(yu)半(ban)(ban)胱(guang)(guang)(guang)天(tian)(tian)冬(dong)(dong)酶(mei)1結合(he)，熒(ying)光(guang)試劑(ji)(ji)保留在細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)內。結合(he)抑制(zhi)胱(guang)(guang)(guang)天(tian)(tian)蛋白酶(mei)1但不會阻止(zhi)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)凋亡的進(jin)行，有(you)多種參(can)數可用于監測細胞凋(diao)亡。
產品優勢
　　這種試(shi)劑(ji)盒(he)旨在通過(guo)測(ce)量活(huo)細(xi)(xi)胞中的caspase 1活(huo)化(hua)來(lai)檢測(ce)細(xi)(xi)胞凋(diao)亡。它用(yong)于定量凋(diao)亡細(xi)(xi)胞中活(huo)化(hua)的半(ban)(ban)胱天(tian)冬酶1活(huo)性，或用(yong)于篩(shai)選半(ban)(ban)胱天(tian)冬酶1抑制劑(ji)。綠(lv)色標(biao)記試(shi)劑(ji)FAM-YVAD-FMK允許通過(guo)熒光(guang)顯微(wei)鏡(jing)，流式細(xi)(xi)胞儀或熒光(guang)酶標(biao)儀直接檢測(ce)凋(diao)亡細(xi)(xi)胞中活(huo)化(hua)的半(ban)(ban)胱天(tian)冬酶1。該試(shi)劑(ji)盒(he)為所有必需組分提供優化(hua)的分析方案(an)。
技術資料
1.Ex(nm)：493
2.Em(nm)：517
訂購信(xin)息

產品組分

實驗方(fang)案
1.用密度為5×105到2×106個(ge)細胞/ mL的測(ce)試(shi)化合(he)物(wu)制備細胞。
2.將FAM-YVAD-FMK以1：150的(de)比例加入到細(xi)胞溶液中。
3在(zai)室溫下孵(fu)育1小時。
4.將(jiang)細胞(bao)沉淀，用緩沖液或生長培養基洗滌并重懸細胞(bao)。
5.在(zai)Ex / Em = 490 / 525nm處分析細胞。
【注】：使(shi)用前將所(suo)有部件在室溫下解凍(dong)。
操作步(bu)驟
1.根據您的(de)特(te)異性誘(you)導(dao)(dao)方案(an)，將細(xi)胞培養(yang)至適(shi)于細(xi)胞凋亡誘(you)導(dao)(dao)的(de)密(mi)度，但不超過(guo)2 x 106個細(xi)胞/ mL。同(tong)時，對于每(mei)種標記(ji)條(tiao)件，以(yi)與誘(you)導(dao)(dao)群體相同(tong)的(de)密(mi)度培養(yang)非誘(you)導(dao)(dao)的(de)陰性對照細(xi)胞群。以(yi)下是(shi)一些誘(you)導(dao)(dao)懸浮培養(yang)細(xi)胞凋亡的(de)例子：
（1）用2μg/ ml喜tree堿處理Jurkat細胞3小時。
（2）用1μM星形(xing)孢菌素處理Jurkat細胞3小時。
（3）用4μg/ ml喜tree堿處理HL-60細胞4小時。
（4）用1μM星形孢菌素處理HL-60細胞4小(xiao)時。
【注】：應對每個(ge)細胞(bao)系進行單獨評估，以確(que)定(ding)誘導細胞(bao)凋亡的合(he)適細胞(bao)密度。
2.通過向FAM-YVAD-FMK（組分A）的小瓶(ping)中加(jia)入50μLDMSO制(zhi)備(bei)150X FAM-YVAD-FMK DMSO儲備(bei)溶液。
3.將150×FAM-YVAD-FMK DMSO儲備溶液(ye)(ye)（來自步驟1）以1：150的比(bi)例(li)添加到(dao)細(xi)胞溶液(ye)(ye)中，并(bing)將細(xi)胞在37℃，5％CO 2培養箱中孵育1小時(shi)。
【注1】：對于FAM-YVAD-FMK標記，細(xi)胞(bao)可以濃縮至(zhi)~5×10 6個(ge)細(xi)胞(bao)/ mL。未(wei)使(shi)用的(de)150X FAM-YVAD-FMK DMSO儲(chu)(chu)備溶液應分為單次使(shi)用的(de)等分試(shi)樣并儲(chu)(chu)存(cun)在 -20 ℃。
【注2】：對于(yu)粘附細(xi)(xi)胞(bao)，用(yong)0.5mM EDTA輕輕提起(qi)細(xi)(xi)胞(bao)以保持細(xi)(xi)胞(bao)完整，并在用(yong)FAM-YVAD-FMK孵育之(zhi)前用(yong)含血清(qing)的培(pei)養基洗(xi)滌(di)細(xi)(xi)胞(bao)一次。
【注3】：適當的孵(fu)育時間取決于所用的細胞類型和細胞濃度。優化每個(ge)實(shi)驗的孵(fu)育時間。
4.將細(xi)胞以約200g旋轉5分(fen)鐘，并用(yong)1mL洗滌緩沖液（組分(fen)B）洗滌細(xi)胞兩次。將細(xi)胞重懸于所(suo)需(xu)量的(de)洗滌緩沖液中(zhong)。
【注1】：FAM-YVAD-FMK是熒光(guang)的，因此清除(chu)任(ren)何未(wei)結(jie)合的試劑以消除(chu)背景(jing)非常(chang)重要(yao)。
【注2】：對于分離的細胞，應將細胞濃(nong)度調節至每個微(wei)量(liang)滴(di)定板孔(kong)中2-5×10 5個細胞/100μL等分試樣，用于步驟6。
5.如果需要，用DNA染色(se)標(biao)記細胞(bao)（如用于死細胞(bao)的碘化丙錠，或用于細胞(bao)核染色(se)的整個(ge)群(qun)體的Hoechst）。
6.通(tong)過熒(ying)光顯(xian)微鏡，流式細胞儀或熒(ying)光酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm處檢(jian)測熒(ying)光強度（對(dui)于碘(dian)化丙錠，Ex / Em = 535/635 nm;對(dui)于Hoechst染料，Ex / Em = 350 / 461納(na)米）。
（1）對于流(liu)式細胞儀(yi)，使用(yong)FL1通道監測熒光強度（FL2通道用(yong)于碘化丙錠染色(se)）。
（2）用于熒光(guang)(guang)顯微鏡和熒光(guang)(guang)酶(mei)標儀。將100μL細胞懸浮液置于96孔黑壁(bi)/微量滴(di)定板透明底(di)部的每個(ge)孔中。
【注(zhu)】：如果(guo)需要平(ping)衡細胞(bao)(bao)濃度，調(diao)整誘(you)導細胞(bao)(bao)的(de)(de)懸浮體(ti)積以接(jie)近非(fei)誘(you)導細胞(bao)(bao)群的(de)(de)細胞(bao)(bao)密度。如果(guo)您的(de)(de)細胞(bao)(bao)治療不會導致受刺激(ji)細胞(bao)(bao)群數(shu)量的(de)(de)顯著損失，則此(ci)調(diao)整步(bu)驟(zou)是可選的(de)(de)。
（3）使用FITC通道在熒光顯微鏡下觀察細胞（用于碘(dian)化(hua)丙啶染(ran)色的(de)TRITC通道，用于Hoechst染(ran)色的(de)DAPI通道）。
（4）使(shi)用熒光酶標儀，使(shi)用Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm處截止）底部(bu)讀(du)取模式監測熒光強(qiang)度。
注意(yi)事項
該產(chan)品僅限于科學(xue)實驗研究使用，不(bu)得用于臨(lin)床診斷、治療等領域(yu)。