產品信息
　　Caspase3/7活(huo)性細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)是(shi)一類(lei)用(yong)于檢(jian)(jian)(jian)測(ce)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)功能的(de)(de)系列(lie)工具(ju)，包括細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)活(huo)性、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)毒性、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)膜(mo)電位以及細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)周期等方面(mian)的(de)(de)指標。每種(zhong)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)方案(an)均能提供不(bu)同熒(ying)光(guang)(guang)顏(yan)色的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)方案(an)。這(zhe)些高(gao)效的(de)(de)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)方案(an)為(wei)從(cong)多(duo)角度研(yan)究細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)功能活(huo)動提供了一種(zhong)十分有(you)效的(de)(de)方法。Caspase 3/7活(huo)性細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)是(shi)通過(guo)(guo)測(ce)量Caspase 3/7的(de)(de)活(huo)性而用(yong)于細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)檢(jian)(jian)(jian)測(ce)的(de)(de)。因(yin)(yin)為(wei)Caspase-3 (CPP32/apopain)在(zai)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)的(de)(de)起始(shi)過(guo)(guo)程(cheng)中發揮(hui)著重(zhong)要作(zuo)(zuo)用(yong)，因(yin)(yin)此其(qi)作(zuo)(zuo)為(wei)一個值得信賴的(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)凋(diao)亡(wang)(wang)指示劑(ji)(ji)廣泛地被大家所(suo)接受。Caspase 3具(ju)有(you)特異性的(de)(de)底物多(duo)肽識別序列(lie)，即天(tian)冬氨酸(suan)-谷*酸(suan)-纈*酸(suan)-天(tian)冬氨酸(suan)(DEVD)。本試(shi)劑(ji)(ji)盒(he)用(yong)Z-DEVD-Rh 110-DVED-Z作(zuo)(zuo)為(wei)Caspase-3活(huo)性的(de)(de)熒(ying)光(guang)(guang)指示劑(ji)(ji)。通過(guo)(guo)Caspase 3作(zuo)(zuo)用(yong)，斷(duan)裂(lie)Rh 110多(duo)肽，產生(sheng)具(ju)有(you)強烈綠色熒(ying)光(guang)(guang)的(de)(de)Rh 110，檢(jian)(jian)(jian)測(ce)其(qi)在(zai)520-530 nm處(chu)的(de)(de)熒(ying)光(guang)(guang)強度，其(qi)激發光(guang)(guang)波長在(zai)340~350nm處(chu)。
產品優勢
　　本(ben)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)盒提(ti)供所(suo)有必需(xu)組(zu)分(fen)和合適(shi)檢測(ce)(ce)方案。本(ben)檢測(ce)(ce)法強大、穩定，能夠用(yong)于(yu)多種熒光研究平臺(tai)的高通量分(fen)析(xi)中，例如微孔板分(fen)析(xi)，免疫組(zu)化和流式細(xi)胞(bao)術。使用(yong)時(shi)96孔板時(shi)，每孔用(yong)100ul試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)，本(ben)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)盒提(ti)供的試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)足夠進行200次(ci)檢測(ce)(ce)；用(yong)384微孔板時(shi)，每孔加25ul試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)，本(ben)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)盒提(ti)供的試(shi)(shi)(shi)劑(ji)(ji)足夠進行800次(ci)檢測(ce)(ce)。
技(ji)術資料(liao)
1.Ex(nm)：500
2.Em(nm)：522
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產品組分

實驗方案
1.用測試化合物（100μL/孔/ 96孔板(ban)或(huo)25μL/孔/ 384孔板(ban)）制備細胞。
2.加入等(deng)體積(ji)的Caspase 3/7工作溶液(ye)。
3.在室溫(wen)下孵育1小時。
4.監測(ce)Ex / Em = 490/525 nm處的(de)熒光強度（截止= 515 nm）。
5.將50μLCaspase3/7底物（組分A）加入10mL測定緩沖(chong)液（組分B）中并充分混(hun)合以制(zhi)備(bei)Caspase 3/7工作溶液。
操作步驟
1.通過將10μL/孔(kong)的(de)(de)10X測試化合物（96孔(kong)板）或(huo)5μL/孔(kong)的(de)(de)5X測試化合物（384孔(kong)板）加(jia)入PBS或(huo)所(suo)需緩(huan)沖液中(zhong)來處理細胞(bao)。對于(yu)空白孔(kong)（沒有細胞(bao)的(de)(de)培(pei)養(yang)基），加(jia)入相同量的(de)(de)化合物緩(huan)沖液。
2.將細胞(bao)板在37℃，5％CO2，培養箱中(zhong)孵育所(suo)需(xu)的一段時(shi)間(jian)（對于用喜*堿(jian)處理的Jurkat細胞(bao)，4-6小時(shi)）以誘導細胞(bao)凋(diao)亡。
3.加100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Caspase 3/7工作(zuo)溶液。
4.將板在室溫下孵(fu)育至(zhi)少1小時，避光。
【注(zhu)】：如(ru)果需要(yao)，在室(shi)溫下加(jia)入(ru)Caspase 3/7工作溶液10分鐘后，將1μL1mM Ac-DEVD-CHO caspase 3/7抑(yi)制劑(ji)加(jia)入(ru)到選定的樣(yang)品(pin)中，以(yi)確(que)認抑(yi)制半胱天冬酶3/7樣(yang)活動。
5.以800rpm離心細胞(bao)板（特別是對于非(fei)貼壁細胞(bao)）2分鐘（制動關(guan)閉(bi)）。
6.用熒(ying)光(guang)(guang)酶(mei)標儀(yi)在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下(xia)監(jian)測熒(ying)光(guang)(guang)強度。
數據分析
 
圖(tu)1. Jurkat細胞中半(ban)胱(guang)天冬酶3/7活性的檢(jian)測

　　Jurkat細胞(bao)在(zai)同一天以80,000個細胞(bao)/孔/90μL接(jie)種在(zai)黑色壁/透明底96孔板中。用或(huo)(huo)不用20μM喜(xi)*堿處理細胞(bao)5小時(shi)，和(he)/或(huo)(huo)用5μM半胱天冬酶(mei)3/7抑制劑AC-DEVD-CHO處理細胞(bao)10分鐘。加入半胱天冬酶(mei)3/7工作溶液（100μL/孔）并在(zai)室(shi)溫下(xia)溫育1小時(shi)。使(shi)用NOVOstar儀器（BMG Labtech）在(zai)Ex / Em = 490 / 525nm（截止(zhi)值(zhi)= 515nm）下(xia)測量(liang)熒光強度。
注意事項
　　該產品僅限于科學(xue)實驗研究使用(yong)，不得用(yong)于臨床診(zhen)斷、治療等領域。