產品(pin)信息
　　Caspase 8活(huo)性細胞凋亡檢測(ce)試劑盒(he)是通(tong)過測(ce)量Caspase 8的(de)活(huo)性而用于細胞凋亡檢測(ce)的(de)。Caspase 8 是一種Caspase蛋(dan)白，CASP8基因所編碼(ma)。在神(shen)經元(yuan)變性疾病中，例如亨廷頓綜合癥，caspase 8扮演著(zhu)重要角色(se)。Caspase 8已(yi)被證明(ming)具有底物選擇性，其肽(tai)基序為Ile-Glu-Thr-Asp (IETD)。該試劑盒(he)使(Ac-IETD)2-R110作為熒光(guang)指示器(qi)來檢測(ce)caspas-8的(de)活(huo)性。通(tong)過caspas-8的(de)切割R110肽(tai)產(chan)生強綠色(se)熒光(guang)，其發射光(guang)在520 nm和(he)530 nm之間，激發光(guang)為480 nm和(he)500 nm之間。這種特(te)性使得試劑盒(he)能適合于FITC濾光(guang)器(qi)。
產品(pin)優勢
　　本試劑盒提供所有必(bi)需組分和合(he)適的(de)操作流程。該實驗結果(guo)穩定，快速(su)且適應(ying)高通(tong)量篩選。它不僅(jin)能夠定量凋亡細胞中caspas-8的(de)活(huo)性還能篩選caspas-8的(de)抑制(zhi)劑。
技術資(zi)料
1.Ex(nm)：500
2.Em(nm)：522
訂購信息

產品組分

實驗方案
1.用測試化合物（100μL/孔(kong)/ 96孔(kong)板或25μL/孔(kong)/ 384孔(kong)板）制備(bei)細胞(bao)。
2.加(jia)入等體積的Caspase 8工(gong)作溶液（100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板）。
3.在室溫(wen)下孵育(yu)30分鐘至1小時。
4.監(jian)測Ex / Em = 490/525 nm處的熒(ying)光(guang)增加（截止(zhi)= 515 nm）。
5.將50μLCaspase8底物（組分A）加(jia)入10mL測定緩沖液（組分B）中并充分混(hun)合以(yi)制備Caspase 8工作溶液（溶液需(xu)避光保存）。
【注】：Caspasae 8工作液不(bu)穩定，請及時使用。 
操作(zuo)步驟
1.通過將10μL/孔的(de)10X測試化合物(wu)（96孔板(ban)）或(huo)5μL/孔的(de)5X測試化合物(wu)（384孔板(ban)）加入PBS或(huo)所需緩沖液中來處理(li)細(xi)胞(bao)。對(dui)于空白(bai)孔（沒(mei)有(you)細(xi)胞(bao)的(de)培(pei)養基），加入相(xiang)同量的(de)化合物(wu)緩沖液。
2.將細胞板(ban)在5％CO 2,37℃培養箱中孵育(yu)所需的一段時間(jian)（對于用喜樹堿或星形(xing)孢菌素處理的Jurkat細胞，4-6小時）以(yi)誘導(dao)細胞凋亡(wang)。
3.加入100μL/孔（96孔板(ban)(ban)）或25μL/孔（384孔板(ban)(ban)）的Caspase 8工(gong)作溶(rong)液。
4.將板(ban)在室(shi)溫下孵育(yu)30分鐘至(zhi)1小(xiao)時，避光。
【注】：如果需要，在室(shi)溫(wen)下加(jia)入Caspase 8工(gong)作溶液10分(fen)鐘前，向(xiang)選定的樣品中加(jia)入1μL的1 mM Ac-IETD-CHO caspase 8抑制劑，以確認(ren)對caspase 8樣活(huo)性的抑制作用。
5.以800rpm離心細胞板（特別是對于非貼壁細胞）2分鐘(zhong)（制(zhi)動關閉(bi)）。
6.用熒光(guang)酶標儀在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）下(xia)監測熒光(guang)增(zeng)加(jia)。
數據分析(xi)
   
圖1.使(shi)用Cell Meter Caspase 8活(huo)(huo)性(xing)細(xi)胞凋亡(wang)檢測試劑盒檢測Jurkat細(xi)胞中的caspase 8活(huo)(huo)性(xing)
 
　　在Costar黑壁/透明底96孔板中以相同的一天(tian)以200,000個細胞(bao)(bao)/90μL/孔接種Jurkat細胞(bao)(bao)。 用(yong)或(huo)不(bu)用(yong)20μM喜樹堿(jian)處理(li)細胞4小(xiao)時。 加入半胱天冬酶8工作溶(rong)液（100μL/孔）并(bing)在室(shi)溫下溫育1小(xiao)時。 使用FlexStation 酶(mei)標儀(yi)（Molecular Devices）在(zai)Ex / Em = 490 / 525nm（截止(zhi)值= 515nm）下測量熒光強(qiang)度。
注(zhu)意(yi)事(shi)項
該產品(pin)僅限于(yu)科(ke)學實(shi)驗研(yan)究使用，不得用于(yu)臨床診斷、治療等領域。