產品(pin)描(miao)述
　　NP40裂解液（帶抑制劑）是一種比較溫和(he)的細胞組織裂解(jie)液，主(zhu)要成分為(wei)50 mM Tris(pH7.4)，150 mM NaCl，1% NP-40以及(ji)sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多種(zhong)抑(yi)制。對胞(bao)(bao)(bao)漿亞組分、胞(bao)(bao)(bao)核成分均有較強裂(lie)解作用，有利于(yu)胞(bao)(bao)(bao)漿蛋(dan)白(bai)、核蛋(dan)白(bai)、胞(bao)(bao)(bao)漿磷(lin)酸化蛋(dan)白(bai)及(ji)細胞(bao)(bao)(bao)核轉錄因子的提取。適(shi)用于(yu)常規(gui)的Western、IP和(he)co-IP等實驗蛋(dan)白(bai)樣品的制備。
訂購信息

產品組(zu)分(fen)

保存(cun)方法
　　裂解液4℃保(bao)(bao)存，其(qi)余-20℃保(bao)(bao)存，保(bao)(bao)質期一年。
使(shi)用方法

對于(yu)貼壁(bi)細(xi)胞(bao)(bao)：去除培養液(ye)，用(yong)PBS、生理鹽水或無血清培養液(ye)洗一(yi)遍(bian)(如果血清中(zhong)的蛋(dan)白沒有干擾，可以不洗)。按照(zhao)6孔(kong)板(ban)每孔(kong)加(jia)入(ru)150~250 μL裂解液(ye)的比例加(jia)入(ru)裂解液(ye)。用(yong)槍吹打數下，使裂解液(ye)和(he)細(xi)胞(bao)(bao)充分接觸。通常裂解液(ye)接觸細(xi)胞(bao)(bao)1~2秒后，細(xi)胞(bao)(bao)就會被裂解。
對于懸浮(fu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)：離心(xin)收集細(xi)(xi)胞(bao)(bao)，按照6孔(kong)板每孔(kong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)加入150~250 μL裂(lie)解液的比例加入裂(lie)解液，混(hun)勻，充分(fen)裂(lie)解細(xi)(xi)胞(bao)(bao)。充分(fen)裂(lie)解后應(ying)沒(mei)有(you)明顯的細(xi)(xi)胞(bao)(bao)沉淀(dian)。如果細(xi)(xi)胞(bao)(bao)量(liang)較(jiao)多，必需(xu)分(fen)裝(zhuang)成50~100萬細(xi)(xi)胞(bao)(bao)/管，然后再裂(lie)解。具體NP-40裂(lie)解液的使用量(liang)參(can)照表(biao)1。

2. 對(dui)于組織(zhi)樣品
(1) 把組(zu)織(zhi)*切成細小的碎片；
(2) 融解NP-40裂(lie)解液(ye)，混勻。取適當量的(de)裂(lie)解液(ye)，在(zai)使用前(qian)數(shu)分鐘內加入PMSF，使PMSF的(de)終濃度為1mM。
(3) 按照每20 mg組織(zhi)加(jia)入150~250 μL裂(lie)(lie)解(jie)(jie)液的比例(li)加入裂(lie)(lie)解(jie)(jie)液。如(ru)果(guo)裂(lie)(lie)解(jie)(jie)不充分可(ke)以適當(dang)添加更(geng)多的裂(lie)(lie)解(jie)(jie)液，如(ru)果(guo)需(xu)要高濃度的蛋白樣品，可(ke)以適當(dang)減(jian)少裂(lie)(lie)解(jie)(jie)液的用量(liang)。
(4) 用玻璃勻(yun)漿器(qi)勻(yun)漿，直至充分裂解。
(5) 充分裂解后(hou)，10000~14000 rpm離心3~5 min，取(qu)上清，即可進(jin)行(xing)后續的PAGE、Western和免(mian)疫沉(chen)淀等操作。
注意事項

然后同(tong)樣離心(xin)取上清，用于后續實驗。直接裂解(jie)的優點是比較方便，不必使(shi)用勻(yun)漿器，缺點是不如使(shi)用勻(yun)漿器那樣裂解(jie)得比較充(chong)分(fen)。

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