產品描述(shu)
　　SDS細胞裂解液（帶抑制劑）是一種比較強烈的細胞組織裂解液，通過陰離子去垢劑SDS促進細胞膜的崩解，特別適用于膜蛋白或者細胞骨架蛋白等難溶蛋白的溶解，有利于膜蛋白，胞漿蛋白、核蛋白、胞漿磷酸化蛋白及細胞核轉錄因子的提取。本產品具有有強烈的蛋白變性作用，不能用于非變性蛋白方面的研究。本產品裂解得到的蛋白樣品可用于常規的Western、染色質免疫共沉淀 (chromatin immunoprecipitation，ChIP)等。
訂購信息

產(chan)品組分

保存方法
　　裂解液4℃保(bao)存，其余-20℃保(bao)存，保(bao)質期一(yi)年。
使用(yong)方法(fa)
1. 對于培養細胞(bao)樣品

對于貼壁細胞：去除培養液(ye)，用PBS、生理鹽水或無血(xue)清培養液(ye)洗一遍(如果血(xue)清中的蛋白沒有干(gan)擾(rao)，可以不洗)。按照6孔板每(mei)孔加入150~250 μL裂解(jie)液(ye)的比例加入裂解(jie)液(ye)。用(yong)槍吹(chui)打數(shu)下，使(shi)裂解(jie)液(ye)和細(xi)胞充分接觸(chu)(chu)。通常裂解(jie)液(ye)接觸(chu)(chu)細(xi)胞1~2秒后(hou)，細(xi)胞就會被裂解(jie)(jie)。如果用(yong)于ChIP，初步裂解(jie)(jie)后(hou)需在(zai)冰浴上(shang)繼續裂解(jie)(jie)10 min。
對于懸浮細(xi)胞(bao)：離心收集細(xi)胞(bao)，用(yong)(yong)手指把(ba)細(xi)胞(bao)用(yong)(yong)力彈(dan)散。按照6孔(kong)板(ban)每孔(kong)細(xi)胞(bao)加入150~250 μL裂解液的比例(li)加入裂解液。再用手指輕彈(dan)以充分(fen)裂解細胞。如果細胞量較多，必需分(fen)裝(zhuang)成50~100萬細胞/管，然(ran)后(hou)再裂(lie)解(jie)(jie)。充分裂(lie)解(jie)(jie)后(hou)應(ying)沒有明(ming)顯的細胞沉淀(dian)。如果用于ChIP，初步(bu)裂(lie)解(jie)(jie)后(hou)需(xu)在(zai)冰浴(yu)上繼(ji)續(xu)裂(lie)解(jie)(jie)10分鐘。具(ju)體SDS細胞裂(lie)解液的(de)使用量(liang)參照表1.
(3) 充分裂解后(hou)，10000~14000rpm離心3~5 min，取上清，即可進(jin)行(xing)后(hou)續的PAGE、Western和ChIP等操(cao)作(zuo)。
2. 對于(yu)組(zu)織(zhi)樣品：
(1) 把(ba)組織*切(qie)成細(xi)小的碎片。
(2) 融解SDS細胞裂解(jie)液，混勻。取適(shi)當量的(de)(de)裂解(jie)液，在使(shi)(shi)用前數分鐘內加入PMSF，使(shi)(shi)PMSF的(de)(de)終濃度為1mM。
(3) 按(an)照每20毫克組(zu)織加入(ru)150—250μL裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)的比(bi)例加入(ru)裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)，如果裂(lie)(lie)解(jie)不充分可以(yi)適當添加更多的裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)，如果需要(yao)高濃度的蛋白樣品(pin)，可以(yi)適當減少裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)的用量(liang)。具(ju)體(ti)SDS細胞裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)的用量(liang)參(can)照表1。
(4) 用玻(bo)璃勻(yun)漿器勻(yun)漿，直至充分裂(lie)(lie)解。如果用于ChIP，初步裂(lie)(lie)解后需在冰浴(yu)上繼續裂(lie)(lie)解10分鐘。
(5) 充分裂解后，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western和ChIP等操(cao)作。
注意事項

表1 :SDS細胞裂解液的使用(yong)量

相(xiang)關試(shi)劑推(tui)薦
EZ ECL化學發光液（貨號：AP34L024）
BCA蛋白定量試劑盒（貨(huo)號：AP12L025）