RIPA裂解液 （強）

產品描述(shu)
RIPA (Radio Immunoprecipitation Assay)裂解液，是一種經典的動物組織/細胞快速裂解液，通過組合離子型去垢劑和非離子去污劑對組織細胞的消化作用使組織細胞崩解釋放出蛋白質，對細胞膜、胞漿亞組分、胞核成分均有較強裂解作用。適用于PAGE、Western Blotting和免疫沉淀(IP)的研究。
本產(chan)品不含(han)PMSF組(zu)分。
訂購信息

運輸與(yu)保存
常溫運輸。4℃保存(cun)，有效期12個月(yue)。
使用方(fang)法(fa)
貼壁細胞(bao)
1.      取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混(hun)合物(100×，不含EDTA) （貨號(hao):AP02L084） 或PMSF(終濃度為 1 mM，但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2.      去除細(xi)胞培(pei)養液(ye)(ye)，用預冷的(de)(de) PBS 洗滌兩次。按照6孔板每孔加入(ru)150-200ul 的(de)(de)裂解液(ye)(ye)的(de)(de)比例均勻加入(ru)裂解液(ye)(ye)，如(ru)果(guo)細(xi)胞密(mi)度過高可增加裂解液(ye)(ye)的(de)(de)量至250-300 uL。【注】：裂解液(ye)(ye)過少會使細(xi)胞裂解不(bu)充(chong)分，影響蛋白提取(qu)的(de)(de)質量。
3.      用槍吹(chui)打(da)數下，冰上放置10 min，期(qi)間(jian)每隔2 min用槍吹(chui)打(da)數下。
4.      轉移(yi)細胞(bao)裂解液于1.5 mL EP管中。
5.      12,000 g，4℃ 離心(xin)5min。
6.      收集上清。
懸浮細胞
1.      取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不(bu)含EDTA) （貨號:AP02L084） 或PMSF(終濃度為 1 mM，但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性）。
2.      收集細胞0.5~2x10⁷于1.5mL離心管中，1mL預冷的PBS洗滌兩次，1,000xg 離心3 min，棄上清，重復三次。
3.      按照6孔(kong)板每孔(kong)加(jia)(jia)(jia)入150-200uL 的裂解(jie)(jie)液的比例均勻(yun)加(jia)(jia)(jia)入裂解(jie)(jie)液，如果細(xi)胞密度過高(gao)可(ke)增加(jia)(jia)(jia)裂解(jie)(jie)液的量至250-300uL。【注】：裂解(jie)(jie)液過少會(hui)使細(xi)胞裂解(jie)(jie)不充(chong)分，影響蛋白(bai)提(ti)取的質(zhi)量。
4.      用槍吹打(da)數(shu)下并劇烈震蕩，冰上放置10 min，期(qi)間每隔2 min震蕩一次。
5.      12,000 g，4℃ 離(li)心5 min。
6.      收集上(shang)清(qing)。
組織樣(yang)品(pin)
1.      把組織*成細小的碎片(pian)。
2.      取適量裂解液，加入蛋白酶抑制劑混合物(100×，不含EDTA) （貨號(hao):AP02L084） 或PMSF(終濃度為 1 mM，但PMSF不足以抑制所有蛋白酶活性）。
3.      按照(zhao)每100mg組織加入1mL裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)(ye)(ye)的比例加入裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)(ye)(ye)（如裂(lie)(lie)解(jie)不充分可(ke)適當(dang)增(zeng)加裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)(ye)(ye)，如果需要增(zeng)加蛋(dan)白濃度可(ke)適當(dang)減(jian)少使用的裂(lie)(lie)解(jie)液(ye)(ye)(ye)體積）。
4.      用勻漿(jiang)(jiang)器勻漿(jiang)(jiang)，直(zhi)至充分(fen)裂解（為防止(zhi)蛋(dan)白(bai)降解請于冰上操作）。
5.      12,000 g，4℃ 離(li)心5 min。
6.      收集上清。
注(zhu)意事項(xiang)

1. 本產品僅限于科學實(shi)驗(yan)研究使(shi)用(yong)，不得用(yong)于臨床診斷、治療等領域。

2. 如需檢測磷酸化蛋白，則需要額外添加磷酸酶抑制(zhi)劑(ji)II cocktail（50×）(貨(huo)號(hao):AP03L025) 。

3. RIPA裂(lie)解液的(de)裂(lie)解產物(wu)中經常(chang)會出現一(yi)小(xiao)團透明(ming)膠(jiao)狀物(wu)，屬正常(chang)現象。該透明(ming)膠(jiao)狀物(wu)為含有基(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)DNA等的(de)復(fu)合物(wu)。在不檢(jian)測(ce)基(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)DNA結合特(te)(te)別緊(jin)密(mi)的(de)蛋白(bai)的(de)情況下(xia)，可以直接(jie)離(li)心(xin)取上清用于后續實驗(yan)；如果(guo)需要檢(jian)測(ce)和基(ji)因(yin)(yin)組(zu)(zu)結合特(te)(te)別緊(jin)密(mi)的(de)蛋白(bai)，則可以通過超(chao)聲處理打碎(sui)打散該透明(ming)膠(jiao)狀物(wu)，隨后離(li)心(xin)取上清用于后續實驗(yan)。如果(guo)檢(jian)測(ce)一(yi)些(xie)常(chang)見的(de)轉錄(lu)因(yin)(yin)子，例如NF-kappaB、p53等時，通常(chang)不必進(jin)行超(chao)聲處理，就可以檢(jian)測(ce)到這(zhe)些(xie)轉錄(lu)因(yin)(yin)子。

4. RIPA（強）裂解(jie)液含有較高濃度的去垢劑，不能用Bradford法(fa)測定(ding)蛋白。

5. 如(ru)果組織樣品本(ben)身非常(chang)細小，可以適(shi)當剪切后(hou)直(zhi)接加入裂(lie)(lie)(lie)解(jie)液(ye)裂(lie)(lie)(lie)解(jie)，通過強烈vortex使(shi)樣品裂(lie)(lie)(lie)解(jie)充分(fen)。然(ran)后(hou)同(tong)樣離心取(qu)上清，用(yong)(yong)于(yu)后(hou)續實驗。直(zhi)接裂(lie)(lie)(lie)解(jie)的優(you)點是比(bi)較方便，不(bu)必使(shi)用(yong)(yong)勻漿器(qi)(qi)，缺點是不(bu)如(ru)使(shi)用(yong)(yong)勻漿器(qi)(qi)那樣裂(lie)(lie)(lie)解(jie)得比(bi)較充分(fen)。

6. 通(tong)常6孔板每孔細胞加入(ru)150 μL裂(lie)解(jie)液(ye)已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當(dang)加大裂(lie)解(jie)液(ye)的用量到200 μL或250 μL。

表1: RIPA裂解液的使用(yong)量(liang)

相關產品推薦(jian)
EZ ECL pico化學發光液（超敏型）（貨號：AP34L024）
BCA蛋白定量試劑盒（貨號：AP12L025）