產品描述
　　Western及IP裂(lie)(lie)解液是一(yi)種在非變性條件下裂(lie)(lie)解細胞(bao)(bao)的(de)裂(lie)(lie)解液，對胞(bao)(bao)漿(jiang)亞(ya)組分、胞(bao)(bao)核成分均有(you)較(jiao)強裂(lie)(lie)解作(zuo)用，有(you)利于胞(bao)(bao)漿(jiang)蛋白(bai)(bai)、核蛋白(bai)(bai)、胞(bao)(bao)漿(jiang)磷(lin)酸化蛋白(bai)(bai)及細胞(bao)(bao)核轉錄(lu)因子的(de)提取。適用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
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產品組分

保存方法
　　裂(lie)解液4℃保(bao)存，其余-20℃保(bao)存，保(bao)質期(qi)一年。
使(shi)用方法
1. 對(dui)于培養(yang)細胞(bao)樣(yang)品
(1) 融解(jie)Western及IP裂解(jie)液，混勻。取適當量(liang)的(de)裂解(jie)液，在(zai)使(shi)(shi)用前數分鐘內(nei)加(jia)入(ru)PMSF，使(shi)(shi)PMSF的(de)終濃度為1 mM。
(2) 細胞裂(lie)解
對于(yu)貼壁細胞：去除培養(yang)液(ye)，用PBS、生理鹽(yan)水或無血(xue)清培養(yang)液(ye)洗一(yi)遍(bian)(如果血(xue)清中的蛋白(bai)沒有干擾，可(ke)以(yi)不(bu)洗)。按照6孔(kong)板每孔(kong)加入100~200 μL裂(lie)解(jie)液(ye)的比例(li)加入裂(lie)解(jie)液(ye)。用槍吹打數下，使裂(lie)解(jie)液(ye)和細胞(bao)充分接(jie)觸(chu)。通常裂(lie)解(jie)液(ye)接(jie)觸(chu)細胞(bao)1~2 s后(hou)，細胞就會被裂解。
對(dui)于懸浮細胞：離(li)心收集細胞，用手指把細胞用力(li)彈散。按照6孔(kong)板每孔(kong)細胞加入100~200 μL裂(lie)解(jie)液的比例加入裂(lie)解(jie)液。再用手指輕彈以充分裂(lie)解(jie)細胞(bao)(bao)。充分裂(lie)解(jie)后(hou)應沒有明顯的細胞(bao)(bao)沉淀(dian)。如果細胞(bao)(bao)量較多，必需分裝成(cheng)50~100萬細胞/管，然后再裂解(jie)。大(da)團的細胞較難裂解(jie)充(chong)分(fen)，而(er)少量的細胞由(you)于裂解(jie)液容易和細胞充(chong)分(fen)接觸(chu)，相對比較容易裂解(jie)充(chong)分(fen)。具體Western/IP裂解(jie)液的使用量(liang)參照表1。
(3) 充分裂解后(hou)，10000~14000 rpm離心3~5 min，取上清(qing)，即可進行(xing)后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
2. 對于組織樣(yang)品
(1) 把(ba)組(zu)織*切(qie)成細小的碎片；
(2) 融解Western及IP細(xi)胞裂解液(ye)，混勻。取適當量的裂解液(ye)，在使(shi)用前數(shu)分鐘內(nei)加入PMSF，使(shi)PMSF的終濃(nong)度為1 mM。
(3) 按(an)照(zhao)每(mei)20 mg組織(zhi)加(jia)入(ru)100~200 μL裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)的(de)(de)比例加(jia)入(ru)裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)，如(ru)果裂(lie)解(jie)不充分可以適當(dang)添加(jia)更多(duo)的(de)(de)裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)，如(ru)果需要高濃度的(de)(de)蛋(dan)白樣品，可以適當(dang)減少裂(lie)解(jie)液(ye)(ye)的(de)(de)用量。具體Western/IP裂解(jie)液的(de)使用(yong)量參照(zhao)表1。
(4) 用(yong)玻璃勻漿器(qi)勻漿，直至充分裂解(jie)。  
(5) 充分(fen)裂(lie)解(jie)后，10000~14000 rpm離(li)心(xin)3~5 min，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉(chen)淀和免疫共沉(chen)淀等操(cao)作。
注意事項

2. 通常(chang)6孔板每(mei)孔細胞加入100 μL裂(lie)(lie)解(jie)液已經足夠，但如果(guo)細胞密度非(fei)常高(gao)可以適(shi)當加(jia)大裂(lie)(lie)解(jie)液的(de)用量(liang)到150 μL或(huo)200 μL。
3. 如果(guo)組織樣(yang)(yang)品(pin)本身(shen)非常細(xi)小，可(ke)以適當剪切后直(zhi)接(jie)加(jia)入裂(lie)解液裂(lie)解，通過強烈vortex使(shi)(shi)樣(yang)(yang)品(pin)裂(lie)解充分(fen)。然后同樣(yang)(yang)離心取上清，用于后續實驗。直(zhi)接(jie)裂(lie)解的優點(dian)是(shi)比(bi)較(jiao)方(fang)便，不必(bi)使(shi)(shi)用勻漿器，缺點(dian)是(shi)不如使(shi)(shi)用勻漿器那(nei)樣(yang)(yang)裂(lie)解得比(bi)較(jiao)充分(fen)。
表1： Western/IP細胞裂(lie)解(jie)液(ye)的使用量(liang)參考表(biao)

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