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Alexa Fluor 488-Phalloidin, Alexa Fluor488 標記鬼筆環肽

產品(pin)描述(shu)

鬼筆環(huan)肽是從一種菌類Amanita Dhalloides所提取出來(lai)的(de)(de)環(huan)肽。它與(yu)F-actin競爭性的(de)(de)結合。熒(ying)光標記的(de)(de)鬼筆環(huan)肽在納克水(shui)平就可與(yu)F-actin選擇性的(de)(de)結合并且易溶于(yu)水(shui)，為檢測組織(zhi)切片，培養細胞和無細胞體系中的(de)(de)actin的(de)(de)定位和定量提供了非常方便的(de)(de)標記方法。

本品(pin)為(wei)Alexa Fluor488標(biao)記(ji)的(de)(de)(de)鬼(gui)筆(bi)環(huan)(huan)(huan)肽，可發出高亮度(du)、穩定的(de)(de)(de)綠色(se)熒(ying)光，染色(se)反應特(te)異(yi)性(xing)(xing)強，對(dui)比性(xing)(xing)高，適合用(yong)作(zuo)F-actin的(de)(de)(de)定性(xing)(xing)和定量檢(jian)測。與Actin抗(kang)體比較，Alexa Fluor488 鬼(gui)筆(bi)環(huan)(huan)(huan)肽具有(you)(you)如下優點：1）與actin亞單位一(yi)比一(yi)結(jie)合，并且不與G-actin結(jie)合，具有(you)(you)比Actin抗(kang)體更(geng)好的(de)(de)(de)染色(se)效果(guo)；2）且本品(pin)的(de)(de)(de)結(jie)合沒(mei)有(you)(you)物(wu)種差異(yi)性(xing)(xing)，適用(yong)性(xing)(xing)廣泛；3）鬼(gui)筆(bi)環(huan)(huan)(huan)肽標(biao)記(ji)的(de)(de)(de)非特(te)異(yi)性(xing)(xing)信號可忽略，因而圖(tu)像的(de)(de)(de)反差較好；4）染色(se)與用(yong)于(yu)細胞分(fen)析的(de)(de)(de)其他(ta)(ta)熒(ying)光染色(se)*兼容，包括熒(ying)光蛋白、Qdot® 納米晶體和其他(ta)(ta)Alexa Fluor偶(ou)聯物(wu)（包含Alexa Fluor偶(ou)聯二抗(kang)）；5）經本品(pin)結(jie)合后的(de)(de)(de)F-actin仍能維持actin自身具有(you)(you)的(de)(de)(de)許多(duo)生物(wu)學特(te)性(xing)(xing)。

技術資料

1. Ex(nm)：493

2. Em(nm)：517

3. 分子量：1900

4. 溶劑(ji)：DMSO

5. 結構式：

運(yun)輸與保(bao)存方法

冰袋運輸。收(shou)到(dao)貨后(hou)-20℃避光干(gan)燥保(bao)存，1年有效。

使(shi)用方法：

1.   準備1000x DMSO Alexa FluorTM 488標記(ji)鬼筆環肽存儲(chu)液

用30µL DMSO 溶解粉末狀Alexa FluorTM 488標記鬼筆環肽，可按需分裝并于-20℃避光干燥(zao)保存，分裝保(bao)存，避免(mian)反復凍(dong)融。

2.   準備1x Alexa Fluor 488標記鬼(gui)筆環(huan)肽工作液

吸取1µL 1000×Alexa Fluor 488標(biao)記鬼(gui)筆環肽存儲液(ye)到(dao)1ml 含(han)有1%BSA的(de)PBS緩沖液(ye)中即可得到(dao)1×工作(zuo)液(ye)。

注意：不同的細胞染色狀(zhuang)況不同，相應(ying)Alexa Fluor 488鬼筆環肽使(shi)用量也需根據不同情況而定。

3. 細胞染色步驟(zou)

1）細胞(bao)培養過夜(ye)或更長，使其(qi)密(mi)度達到(dao)50-60%匯合度。

2）吸掉培養液，37℃預(yu)熱(re)的1×PBS（pH 7.4）清洗細(xi)胞2次。

3）使用含有3-4%甲醛的PBS溶(rong)液進行(xing)細胞固定，室溫(wen)固定10-30min。

注(zhu)意(yi)：避免固定劑中含有(you)甲醇成分，因為甲醇在固定過程(cheng)中可(ke)能破壞肌動蛋(dan)白。

4）室溫條件下(xia)，用PBS清洗固定好的細胞2~3次(ci)，每次(ci)10min。

5）（可(ke)選(xuan)）：室溫條件下，用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透(tou)(tou)化處(chu)理3-5min，從而增加其通透(tou)(tou)性(xing)。

注意：鬼筆(bi)環肽(tai)的分子(zi)量小，很容易通過細(xi)胞，一般情況下不需(xu)對(dui)細(xi)胞進行冷丙酮和(he)TRITON X-100處理(li)。

6）室(shi)溫(wen)條(tiao)件(jian)下(xia)，用PBS清(qing)洗細胞2~3次，每(mei)次10min。

7）每孔加入 ;Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽(tai)工作液100µl/孔（96孔板），室溫避光染色20-90min，夏季時間相(xiang)對短些。

8）用PBS清洗細(xi)胞3次(ci)，每次(ci)5min，去除(chu)掉多余(yu)的(de)Alexa Fluor 488標記鬼筆環肽。

9）（可選(xuan)）：加(jia)入足量的即用型DAPI溶液對細(xi)胞核(he)進行復染，如：100µl/孔（96孔板(ban)），室溫3~5min。用PBS清洗(xi)細(xi)胞2次(ci)，每次(ci)5min。

10）于(yu)熒光顯微(wei)鏡或者共聚(ju)焦顯微(wei)鏡下進行熒光觀察，選擇Alexa FluorTM 488激(ji)發/發射(she)濾片（Ex/Em=493/517nm）和(he)/或DAPI激(ji)發/發射(she)濾片（Ex/Em=364/454nm）。