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Alexa Fluor 647-Phalloidin, Alexa Fluor647 標記鬼筆環肽

產品描述(shu)

鬼(gui)筆環(huan)肽(tai)是從一(yi)種菌類Amanita Dhalloides所提取出來的(de)(de)環(huan)肽(tai)。它與(yu)F-actin競爭性的(de)(de)結(jie)合。熒光標(biao)記(ji)的(de)(de)鬼(gui)筆環(huan)肽(tai)在納(na)克水平就(jiu)可(ke)與(yu)F-actin選擇性的(de)(de)結(jie)合并且易(yi)溶于水，為檢測組織(zhi)切片，培養細(xi)胞和無細(xi)胞體(ti)系中的(de)(de)actin的(de)(de)定位和定量(liang)提供(gong)了非(fei)常方(fang)(fang)便的(de)(de)標(biao)記(ji)方(fang)(fang)法。

本品為Alexa Fluor647標記的(de)鬼筆(bi)環(huan)肽，可(ke)發出高(gao)亮度、穩定(ding)(ding)的(de)遠紅外熒光，染(ran)色反(fan)應特異(yi)性(xing)(xing)強，對比(bi)性(xing)(xing)高(gao)，適(shi)合用(yong)(yong)作F-actin的(de)定(ding)(ding)性(xing)(xing)和(he)定(ding)(ding)量檢測(ce)。與(yu)Actin抗(kang)體比(bi)較(jiao)，Alexa Fluor647 鬼筆(bi)環(huan)肽具(ju)有(you)如下優點：1）與(yu)actin亞(ya)單位一(yi)比(bi)一(yi)結合，并(bing)且不與(yu)G-actin結合，具(ju)有(you)比(bi)Actin抗(kang)體更好的(de)染(ran)色效果；2）且本品的(de)結合沒有(you)物種差(cha)異(yi)性(xing)(xing)，適(shi)用(yong)(yong)性(xing)(xing)廣泛(fan)；3）鬼筆(bi)環(huan)肽標記的(de)非特異(yi)性(xing)(xing)信(xin)號可(ke)忽略，因而圖像的(de)反(fan)差(cha)較(jiao)好；4）染(ran)色與(yu)用(yong)(yong)于細胞分(fen)析(xi)的(de)其(qi)他(ta)熒光染(ran)色*兼(jian)容，包括熒光蛋白、Qdot® 納米晶體和(he)其(qi)他(ta)Alexa Fluor偶聯物（包含Alexa Fluor偶聯二抗(kang)）；5）經本品結合后的(de)F-actin仍(reng)能維(wei)持actin自身具(ju)有(you)的(de)許(xu)多生物學特性(xing)(xing)。

技術資料

1. Ex(nm)：650

2. Em(nm)：665

3. 分子量：約(yue)2200

4. 溶劑：DMSO

5. 結(jie)構(gou)式：

運輸與保存方法

冰袋運輸。收到貨后-20℃避(bi)光干燥保存，1年(nian)有(you)效(xiao)。

使(shi)用方法：

1.   準(zhun)備1000x DMSO Alexa Fluor 647標(biao)記鬼(gui)筆環肽(tai)存儲液(ye)

用301µL DMSO 溶解粉末狀Alexa Fluor 647標記鬼筆環肽，可按需分裝并于-20℃避(bi)光干(gan)燥(zao)保(bao)存，分裝(zhuang)保存，避免反(fan)復凍融。

2.   準備1x Alexa Fluor 647標記鬼筆(bi)環肽工(gong)作液

吸取1µL 1000×Alexa Fluor 647標記鬼筆環(huan)肽(tai)存(cun)儲(chu)液到(dao)1ml 含有(you)1%BSA的PBS緩沖(chong)液中即可得到(dao)1×工作液。

注意(yi)：不同(tong)(tong)的(de)細胞染色(se)狀(zhuang)況(kuang)不同(tong)(tong)，相應Alexa Fluor 647鬼筆環肽(tai)使用量也需根據(ju)不同(tong)(tong)情況(kuang)而定。

3. 細(xi)胞(bao)染(ran)色(se)步驟

1）細(xi)胞培養過夜(ye)或更(geng)長，使其(qi)密(mi)度達到50-60%匯合度。

2）吸掉培養(yang)液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清(qing)洗細胞(bao)2次。

3）使用含有3-4%甲(jia)醛的(de)PBS溶液進行細胞(bao)固定，室溫固定10-30min。

注意：避(bi)免固定劑(ji)中(zhong)(zhong)含有(you)甲醇成分，因為甲醇在固定過程中(zhong)(zhong)可能破壞(huai)肌動蛋白。

4）室溫(wen)條件下，用PBS清洗固(gu)定好的(de)細胞2~3次，每(mei)次10min。

5）（可選）：室溫條件下(xia)，用溶(rong)于PBS的0.1% Triton X-100溶(rong)液透(tou)化處(chu)理3-5min，從而增加其通透(tou)性。

注意：鬼筆環肽的分子(zi)量(liang)小，很容易通(tong)過細胞，一般(ban)情況下(xia)不需對細胞進(jin)行(xing)冷丙酮和TRITON X-100處(chu)理。

6）室溫條件下(xia)，用PBS清洗(xi)細胞2~3次(ci)，每次(ci)10min。

7）每(mei)孔(kong)(kong)加(jia)入 Alexa Fluor 647標(biao)記鬼筆環肽(tai)工作(zuo)液(ye)100µl/孔(kong)(kong)（96孔(kong)(kong)板(ban)），室溫避光染色20-90min，夏(xia)季時間相(xiang)對短些。

8）用PBS清洗細胞(bao)3次，每次5min，去除(chu)掉多余的Alexa Fluor 647標記鬼(gui)筆環肽(tai)。

9）（可選(xuan)）：加入足(zu)量的即用(yong)型(xing)DAPI溶液對細胞(bao)核進行復染，如(ru)：100µl/孔（96孔板），室(shi)溫3~5min。用(yong)PBS清洗細胞(bao)2次，每次5min。

10）于熒光顯微鏡(jing)或(huo)者共聚(ju)焦顯微鏡(jing)下進行熒光觀察，選擇Alexa Fluor 647激發(fa)/發(fa)射濾片（Ex/Em=650/665nm）和(he)/或(huo)DAPI激發(fa)/發(fa)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。