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Alexa Fluor 555-Phalloidin, Alexa Fluor 555 標記鬼筆環肽

產(chan)品描述

鬼筆環肽是從一種菌(jun)類Amanita Dhalloides所提取出來的(de)(de)(de)環肽。它與(yu)(yu)F-actin競爭(zheng)性的(de)(de)(de)結合(he)。熒光標(biao)記的(de)(de)(de)鬼筆環肽在納克水(shui)平就可與(yu)(yu)F-actin選(xuan)擇(ze)性的(de)(de)(de)結合(he)并且(qie)易溶于(yu)水(shui)，為檢測組織切(qie)片，培養細(xi)胞和(he)無細(xi)胞體系中(zhong)的(de)(de)(de)actin的(de)(de)(de)定位和(he)定量提供了非(fei)常方(fang)便的(de)(de)(de)標(biao)記方(fang)法(fa)。

本(ben)品(pin)為Alexa Fluor555標(biao)記(ji)的鬼筆(bi)環肽(tai)，可發(fa)出高亮度、穩定(ding)的橘色熒光，染色反應(ying)特(te)異(yi)性(xing)強(qiang)，對比(bi)性(xing)高，適(shi)合(he)用(yong)(yong)作F-actin的定(ding)性(xing)和定(ding)量(liang)檢測。與(yu)Actin抗(kang)體比(bi)較，Alexa Fluor555 鬼筆(bi)環肽(tai)具(ju)有(you)(you)如下(xia)優點：1）與(yu)actin亞(ya)單位一比(bi)一結(jie)合(he)，并且不(bu)與(yu)G-actin結(jie)合(he)，具(ju)有(you)(you)比(bi)Actin抗(kang)體更好的染色效果；2）且本(ben)品(pin)的結(jie)合(he)沒(mei)有(you)(you)物(wu)種差(cha)異(yi)性(xing)，適(shi)用(yong)(yong)性(xing)廣泛；3）鬼筆(bi)環肽(tai)標(biao)記(ji)的非特(te)異(yi)性(xing)信號可忽略(lve)，因而圖像的反差(cha)較好；4）染色與(yu)用(yong)(yong)于(yu)細胞分析的其他(ta)熒光染色*兼容，包(bao)括(kuo)熒光蛋白、Qdot® 納米(mi)晶體和其他(ta)Alexa Fluor偶聯物(wu)（包(bao)含Alexa Fluor偶聯二抗(kang)）；5）經本(ben)品(pin)結(jie)合(he)后的F-actin仍能維持(chi)actin自身具(ju)有(you)(you)的許多生物(wu)學特(te)性(xing)。

技(ji)術資(zi)料

1. Ex(nm)：556

2. Em(nm)：574

3. 分子量(liang)：約1300

4. 溶劑：DMSO

5. 結構式(shi)：

運輸與保(bao)存(cun)方(fang)法

冰袋運(yun)輸(shu)。收到貨后-20℃避(bi)光干燥保(bao)存，1年有效。

使(shi)用方(fang)法：

1.   準備(bei)1000x DMSO Alexa Fluor 555標(biao)記(ji)鬼筆環(huan)肽存(cun)儲液(ye)

用30µL DMSO 溶解粉末狀Alexa Fluor 555標記鬼筆環肽，可按需分裝并(bing)于-20℃避(bi)光干(gan)燥保(bao)存，分裝保(bao)存，避免(mian)反復凍融。

2.   準備(bei)1x Alexa Fluor 555標記鬼(gui)筆環(huan)肽工作液

吸(xi)取(qu)1µL 1000×Alexa Fluor 555標記(ji)鬼(gui)筆環肽存儲液(ye)到(dao)1ml 含有(you)1%BSA的PBS緩沖液(ye)中即可得(de)到(dao)1×工作液(ye)。

注意：不同(tong)(tong)的細胞染色狀況(kuang)(kuang)不同(tong)(tong)，相應(ying)Alexa Fluor 555鬼筆環肽使用量也需根據不同(tong)(tong)情況(kuang)(kuang)而定。

3. 細胞染(ran)色步驟

1）細胞(bao)培養過夜或更長，使其密度達到(dao)50-60%匯合(he)度。

2）吸掉培(pei)養(yang)液，37℃預熱的1×PBS（pH 7.4）清洗細胞2次。

3）使用含有3-4%甲醛的(de)PBS溶液進行細胞固(gu)定，室溫固(gu)定10-30min。

注(zhu)意：避免固定劑中含有甲醇成分，因為甲醇在固定過程中可能破壞肌動蛋白。

4）室溫(wen)條(tiao)件下，用PBS清洗固定好的細胞(bao)2~3次，每次10min。

5）（可選）：室溫條件下，用溶于PBS的(de)0.1% Triton X-100溶液(ye)透化處理3-5min，從而增加其通透性。

注意：鬼筆環肽的分子量小，很(hen)容易通過細胞，一般情況(kuang)下不需對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。

6）室溫條件下，用(yong)PBS清洗細胞2~3次(ci)，每次(ci)10min。

7）每孔加入 Alexa Fluor 555標記(ji)鬼筆環肽工作液100µl/孔（96孔板(ban)），室溫避光(guang)染色20-90min，夏季(ji)時間相對短些。

8）用PBS清洗細胞3次，每次5min，去除掉多余的Alexa Fluor 555標(biao)記鬼(gui)筆環肽。

9）（可選）：加入足量的即用(yong)型DAPI溶液(ye)對細胞核進行復染，如：100µl/孔(kong)（96孔(kong)板），室(shi)溫3~5min。用(yong)PBS清洗(xi)細胞2次，每(mei)次5min。

10）于熒光(guang)顯(xian)微鏡或者共(gong)聚(ju)焦顯(xian)微鏡下進(jin)行(xing)熒光(guang)觀(guan)察，選擇(ze)Alexa FluorTM 555激發(fa)(fa)/發(fa)(fa)射濾片（Ex/Em=556/574nm）和/或DAPI激發(fa)(fa)/發(fa)(fa)射濾片（Ex/Em=364/454nm）。