EZ Trans Lipo細胞轉染試劑（脂質體）

產品描述
EZ Trans Lipo細胞轉染試劑（脂質體）（以(yi)下(xia)簡稱“EZ Trans Lipo"）為李記(ji)生物新研發(fa)的細(xi)胞(bao)轉染試(shi)劑，EZ Trans Lipo以(yi)納米脂質體包裹(guo)核酸(suan)通過特殊遞送機(ji)制，把外源DNA、RNA、siRNA轉入各類細(xi)胞(bao)，能轉染貼(tie)壁(bi)細(xi)胞(bao)、懸浮細(xi)胞(bao)，還可用(yong)于siRNA和shRNA的基(ji)因(yin)敲除(chu)實驗及基(ji)因(yin)表達研究。
經過對近(jin)百種細(xi)胞對比(bi)測試(shi)，EZ Trans Lipo在絕大(da)部分(fen)受檢細胞(bao)(bao)的轉染效率、細胞(bao)(bao)毒(du)性(xing)(xing)表現(xian)均與(yu)進口型產品一致或(huo)更優(you)；具備轉染效率高(gao)、細胞(bao)(bao)毒(du)性(xing)(xing)低、適(shi)用細胞(bao)(bao)廣、性(xing)(xing)價比高(gao)等優(you)點。
訂購信息

運輸與保存
藍冰(bing)運輸(shu)。4℃保存，有效(xiao)期12個月。
使用方法
貼壁細胞（以293T細胞(bao)、96孔板為例）
1.細胞準備(bei)
轉染前一天(tian)(tian)用1酶消化、鋪板，轉染當天(tian)(tian)細胞(bao)密度達(da)到(dao)3.0x10⁵ 個細胞/mL時可進行(xing)轉(zhuan)染, 細(xi)(xi)胞(bao)匯合度達到70%-80%，保證活細(xi)(xi)胞(bao)>90%。
2.準備(bei)DNA-EZ Trans Lipo復合物(wu)
（1）取兩支無菌EP管(guan)(平行樣)，兩個(ge)EP管各加入5 μL不(bu)含抗(kang)生素(su)和血(xue)清(qing)的MEM細胞培養液，然后(hou)每一(yi)管(guan)各(ge)加入(ru)EZ Trans Lipo轉染試劑0.15 μL，輕微吹(chui)吸使(shi)混和均勻。
（2）取一支無菌EP管，加入10 μL不(bu)含(han)抗生素和血清的MEM細(xi)胞培養液，然(ran)后加入(ru)待轉DNA或質粒(li)，確保最終DNA量為0.2 μg，輕微吹吸(xi)使混和均(jun)勻。
（3）分(fen)別吸取將上(shang)述含有DNA的(de)培養液(ye)5μL加入(ru)稀釋好的EZ Trans Lipo的兩個EP管中, 輕輕吹打、晃動使混和均勻，室溫(wen)靜置20 min形成DNA-EZ Trans Lipo 復合物(wu)（室溫條(tiao)件4 h內(nei)性質(zhi)穩定）。
3.轉染(ran)細胞
把DNA-EZ Trans Lipo 復(fu)合物全部加入到96孔(kong)板貼壁培養的293細胞中（試劑有重復樣）。逐滴(di)分散加入，輕微(wei)晃動。
4.細胞檢(jian)測
加入(ru)DNA-EZ Trans Lipo復合物的細胞在 37℃ 培養1-3 d（無(wu)需特意更換(huan)培養液），根據(ju)實驗設計實時觀察或收(shou)獲(huo)細胞檢測。
 
表1：不同培養體(ti)積對應的待轉DNA、EZ Trans、稀釋液用量(liang)

 
 
 
懸浮細胞（以293FT細(xi)胞、1mL培養體積為例）
1.細胞準備(bei)
細胞進行轉染當天，細胞(bao)密度達到(dao)2-2.5x10⁶ 個/mL時(shi)可進(jin)行轉染(ran)，細胞重懸后(hou)匯合度達到70%-80%，保(bao)證(zheng)活細胞>90%。懸浮細胞(bao)細胞(bao)轉染可當天接種(zhong)/鋪板, 只要細(xi)胞狀態穩定即可進(jin)行(xing)。
2.準備DNA-EZ Trans Lipo復合(he)物
（1）取兩支(zhi)無菌EP管(平行樣(yang))，兩個EP管各加入(ru)400μL不(bu)含抗生(sheng)素(su)和血清(qing)的MEM細胞培養液(ye), 然每(mei)一(yi)管各加入(ru)EZ Trans Lipo轉染試劑15μL，輕微(wei)吹(chui)吸使混(hun)和均勻。
（2）取一(yi)支無菌EP管，加(jia)入(ru)800μL不含抗生素和血(xue)清的(de)MEM細胞培(pei)養液，然后加(jia)入(ru)待轉DNA或質粒，確保最終DNA量為20μg，輕微(wei)吹吸使(shi)混和均勻(yun)。
（3）分別吸取將上述含有DNA的培養液400μL加入到稀(xi)釋好的轉(zhuan)染試(shi)劑(ji)培養液的兩個(ge)EP管中, 輕(qing)輕(qing)吹打、晃動使混和均勻，室溫(wen)(wen)靜(jing)置20 min（室溫(wen)(wen)條件(jian)4 h內性質穩定）。
3.轉染細胞
把(ba)DNA-EZ Trans Lipo復合物800μL全部加(jia)入到(dao)1 mL懸浮(fu)培養的293FT細(xi)胞中（有重復樣）。逐(zhu)滴分(fen)散(san)加(jia)入，輕微晃動。
4.細胞檢測
加入DNA-EZ Trans Lipo復合物的細胞(bao)，37℃ 懸浮培(pei)養細(xi)胞(bao)1-3 d（無需特意更(geng)換培養液），根據實驗設(she)計實時(shi)觀察或收獲細胞檢(jian)測(ce)。
注意事項
1.本產品僅限于科學實驗研究使用(yong)，不得(de)用(yong)于臨床診斷(duan)、治療等領域。
2.DNA-EZ Trans Lipo 的轉染(ran)過(guo)程不要求特意更換，但(dan)由(you)于雙(shuang)抗會影響(xiang)重組蛋(dan)白的(de)表達(da)，為獲得最佳(jia)表達(da)效(xiao)果，建(jian)議在細胞轉染(ran)前2 h更換(huan)(huan)成不含抗生素(su)和(he)(he)血清(qing)的培(pei)養基(ji)，在轉后4-6 h換(huan)(huan)回(hui)含抗生素(su)和(he)(he)血清(qing)的培(pei)養基(ji)。
3.質(zhi)粒(li)質(zhi)量：請(qing)務必(bi)使用高質(zhi)量(liang)轉染(ran)級無內毒素質(zhi)粒。通過260 nm光吸收測定(ding)DNA 濃度，260nm / 280nm比(bi)值確(que)定(ding) DNA 純度（比(bi)值應該在1.8～2.0的范(fan)圍之(zhi)內(nei)）。如有可能(neng)，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完(wan)整性。
4.細胞條(tiao)件：使(shi)用(yong)適當保(bao)存(cun)和(he)經常(chang)傳代的健康細胞。確保(bao)培養基沒(mei)有(you)被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存(cun)細胞，請在(zai)轉染前(qian)至(zhi)少傳代兩次。建議使(shi)用(yong)GIBCO或者李記生物(wu)的特(te)級胎牛血清（Foetal Bovine Serum）（貨(huo)號：AC03L055）培養(yang)細胞。
5.為(wei)了(le)減(jian)少操作(zuo)誤(wu)差，上述(shu)操作(zuo)步驟設定了(le)一個重復平行樣，用(yong)戶可根據實(shi)驗室(shi)目(mu)的和實(shi)驗室(shi)條件調整。
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