產品描述
　　消(xiao)化法(fa)中(zhong)常使用的酶(mei)有3種(zhong)：胰*白酶(mei)、膠原酶(mei)以(yi)及透明質(zhi)酸酶(mei)，透明質(zhi)酸酶(mei)多數情況(kuang)下與胰*白酶(mei)或(huo)膠原酶(mei)聯合應用。胰*白酶作用較(jiao)強，容易造成平滑肌細胞損壞，而膠原(yuan)酶作用較緩和，能消(xiao)化細胞間(jian)質中的(de)膠原(yuan)纖(xian)維以(yi)釋放細胞，對細胞損傷小，是(shi)只此(ci)一種可以(yi)降(jiang)解具(ju)有三股(gu)超螺旋(xuan)結(jie)構的(de)天然(ran)膠原(yuan)纖(xian)維的(de)蛋(dan)白酶。
　　膠原(yuan)酶(mei)(mei)(mei)(Collagenase)從溶組織梭(suo)(suo)菌（Clostridium histolyticum）提(ti)取(qu)的(de)一種酶(mei)(mei)(mei)粗提(ti)物，也叫梭(suo)(suo)菌蛋*酶(mei)(mei)(mei)A（clostridiopeptidase A），不(bu)僅含有膠原(yuan)酶(mei)(mei)(mei)，還含有其他(ta)(ta)的(de)一些(xie)蛋白酶(mei)(mei)(mei)、多糖(tang)酶(mei)(mei)(mei)、脂酶(mei)(mei)(mei)等。這些(xie)成分(fen)分(fen)別能夠(gou)有效(xiao)水解結締組織和上皮組織細(xi)胞外基質(zhi)內的(de)其他(ta)(ta)蛋白，多糖(tang)和脂質(zhi)。該酶(mei)(mei)(mei)分(fen)離(li)效(xiao)果(guo)好，即使有鈣、鎂離(li)子存在仍有活(huo)性，故可(ke)(ke)用PBS和含血清的(de)培養液配制，既操作簡便又可(ke)(ke)提(ti)高細(xi)胞成活(huo)率，終(zhong)濃度200u/mL，此(ci)酶(mei)(mei)(mei)消(xiao)化作用緩和，無需機(ji)械振蕩。
　　目前(qian)商(shang)業化提(ti)供的細菌膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)主要根據(ju)膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)活性的差異，分為四(si)種類(lei)型(xing)(xing)：膠(jiao)原(yuan)(yuan)酶(mei)I型(xing)(xing)，II型(xing)(xing)，III型(xing)(xing)和IV型(xing)(xing)，在應用(yong)上有所(suo)偏向(xiang)：(1)膠原酶(mei)(mei)I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶(mei)(mei)活力（包括(kuo)膠原酶(mei)(mei)、酪蛋白(bai)酶(mei)(mei)、梭菌(jun)蛋白(bai)酶(mei)(mei)、胰*白(bai)酶(mei)(mei)活性）。通常用作上皮細(xi)胞(bao)、肝、肺、脂肪(fang)和腎(shen)上腺組(zu)織細(xi)胞(bao)的制(zhi)備。(2)膠原酶(mei)II（Type II Collagenase）：含有(you)更高的梭菌蛋白酶(mei)活性，通(tong)常用于心(xin)臟、骨(gu)、肌肉、胸腺(xian)和軟骨(gu)等組織來源(yuan)細胞的制備。(3)膠原酶(mei)III（Type III Collagenase）：含有較(jiao)低(di)的(de)蛋(dan)*酶(mei)活性，常用于乳腺細(xi)胞的(de)制備。(4)膠原(yuan)酶IV（Type IV Collagenase）：含有低胰(yi)*活性，通常用(yong)于胰(yi)島細胞的制(zhi)備(bei)，或者(zhe)需要維持受體完整性的細胞制(zhi)備(bei)實驗(yan)。

　　Collagenase, TypeⅢ 膠原(yuan)酶(mei)Ⅲ型操作簡便，且與Washington LS00418X/LS004189/LS004188/LS004186等產品相比細胞成活率更高，詳見下文或咨詢銷(xiao)售人員。
訂購(gou)信息

保(bao)存(cun)方法
　　4℃保(bao)存，保(bao)質期一年。
使用方法
1.膠原酶(mei)儲(chu)存(cun)液的配制
向每管100 mg的膠(jiao)原酶中加入100 μL的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平(ping)*鹽溶液，含Ca²⁺、Mg²⁺），輕(qing)輕(qing)旋渦(wo)震蕩使(shi)其充分(fen)溶(rong)解，制備(bei)成1 g/mL（即1000×）的儲存液。然(ran)后用低蛋白結(jie)合性的0.22μm的濾(lv)膜過(guo)濾(lv)除菌(jun)，分裝(zhuang)成小份量(liang)，然(ran)后于-20℃避光凍存。
使(shi)用(yong)前于(yu)冰上解凍，避免反復凍融。其用(yong)于(yu)組織和細胞分散的常(chang)用(yong)濃度為(wei)：0.5~2.5 mg/mL，用(yong)于軟骨消化的常用(yong)濃(nong)度(du)為1~2 mg/mL，需(xu)要根據(ju)特定的實驗條件或者參考相應的文(wen)獻資(zi)料(liao)確定所需(xu)的合適工(gong)作濃度。
2.組(zu)織的分離
（1）使用無(wu)菌shoushu刀或剪刀將組織切成(cheng)3~4 mm大小(xiao)的組織(zhi)塊。
（2）利用含(han)Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗滌組織塊數次。
（3）加(jia)入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的(de)HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠(jiao)原酶至需要工作濃(nong)度。
（4）于37℃孵育4~18 h。消(xiao)化時使(shi)用(yong)水平搖床以及用(yong)3mM的CaCl2補充(chong)消(xiao)化可以提高消(xiao)化效(xiao)率(lv)。
（5）已分散開的細(xi)胞可使(shi)用不銹鋼或(huo)尼龍網篩篩得，收集備用。未(wei)*解離的組織另外添加(jia)適量的新鮮(xian)膠原酶工作液于37℃繼續孵育。
（6）利用不含膠原(yuan)酶的(de)HBSS洗滌收集的(de)細(xi)胞數次(ci)。
（7）細(xi)胞(bao)培(pei)養液重懸上述(shu)細(xi)胞(bao)，利用自動細(xi)胞(bao)計(ji)數器(qi)或其他方法計(ji)算活細(xi)胞(bao)密度(du)。
（8）于細(xi)胞培(pei)養皿上(shang)利用(yong)合適細(xi)胞培(pei)養基接(jie)種細(xi)胞。
3.器(qi)官灌注
（1）向37℃預(yu)熱的(de)含(han)Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入膠原酶(mei)，另添(tian)加3 mM的(de)CaCl₂有(you)助于提高分(fen)離效率。
（2）按照已優化的速(su)率對相應的器(qi)官灌注膠原酶工(gong)作液。
（3）將(jiang)上述過程中回收的灌注液(ye)流經不銹鋼或(huo)尼(ni)龍網篩，從而(er)將(jiang)已解(jie)離的細胞(bao)或(huo)小片段組(zu)織塊與較大團(tuan)塊分離開來，未(wei)充(chong)分解(jie)離的組(zu)織需利用新(xin)鮮膠原酶工作液(ye)于37℃進(jin)一步孵(fu)育。
（4）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次(ci)。
（5）細胞(bao)培養液重懸上(shang)述細胞(bao)，利用自動細胞(bao)計數器(qi)或其(qi)他方法(fa)計算活細胞(bao)密度。
（6）于細胞(bao)培(pei)養皿上利(li)用合適細胞(bao)培(pei)養基接(jie)