產品描述
　　消化(hua)法中常使用的酶有3種：胰*白酶、膠(jiao)原酶以及透(tou)明質(zhi)酸(suan)酶，透(tou)明質(zhi)酸(suan)酶多數情況下與胰*白酶或(huo)膠(jiao)原酶聯合應用。胰*白酶作(zuo)用(yong)較強，容易造成(cheng)平(ping)滑肌細胞損壞，而膠(jiao)原(yuan)酶(mei)作用較(jiao)緩和，能消化細胞(bao)間質中的膠(jiao)原(yuan)纖(xian)維以釋放(fang)細胞(bao)，對(dui)細胞(bao)損傷小，是(shi)只此一種可以降(jiang)解具有(you)三(san)股超螺旋結構的天(tian)然(ran)膠(jiao)原(yuan)纖(xian)維的蛋白(bai)酶(mei)。
　　膠原酶(mei)(mei)(Collagenase)從溶組織梭菌（Clostridium histolyticum）提取的(de)一種酶(mei)(mei)粗提物(wu)，也叫梭菌蛋白(bai)酶(mei)(mei)A（clostridiopeptidase A），不(bu)僅含(han)有(you)膠原酶(mei)(mei)，還含(han)有(you)其(qi)(qi)他(ta)的(de)一些(xie)蛋白(bai)酶(mei)(mei)、多(duo)糖酶(mei)(mei)、脂酶(mei)(mei)等。這(zhe)些(xie)成分分別能夠有(you)效水解結(jie)締組織和上皮(pi)組織細胞外基(ji)質(zhi)內的(de)其(qi)(qi)他(ta)蛋白(bai)，多(duo)糖和脂質(zhi)。該酶(mei)(mei)分離效果好(hao)，即(ji)使有(you)鈣(gai)、鎂離子存在仍有(you)活(huo)性(xing)，故(gu)可(ke)用PBS和含(han)血清(qing)的(de)培養液配(pei)制，既操作(zuo)簡便又可(ke)提高細胞成活(huo)率，終濃(nong)度200u/mL，此酶(mei)(mei)消化作(zuo)用緩和，無需機械振蕩(dang)。
　　目前(qian)商業(ye)化提供的(de)細菌膠原酶主要根據膠原酶活性的(de)差異(yi)，分為四種類型(xing)：膠原酶I型(xing)，II型(xing)，III型(xing)和IV型(xing)，在應用上有所偏向：(1)膠原(yuan)酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力(li)（包括(kuo)膠原(yuan)酶、酪蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶、梭(suo)菌蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)酶、胰*白(bai)(bai)酶活性(xing)）。通常用作上(shang)皮細(xi)胞、肝(gan)、肺、脂肪和腎(shen)上(shang)腺組織細(xi)胞的制備。(2)膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的(de)梭菌蛋白酶活性，通常用于心(xin)臟(zang)、骨(gu)、肌肉(rou)、胸(xiong)腺和軟骨(gu)等組織來(lai)源細胞(bao)的(de)制(zhi)備(bei)。(3)膠原酶(mei)III（Type III Collagenase）：含有(you)較(jiao)低的蛋(dan)白酶(mei)活性(xing)，常用于乳腺細胞的制備。(4)膠(jiao)原酶IV（Type IV Collagenase）：含有低*酶活(huo)性，通常用于胰(yi)島細胞的制備，或者需要維持受體完整性的細胞制備實驗。

　　Collagenase, TypeⅡ膠(jiao)原酶Ⅱ型操作簡便，且與Washington LS00417X/LS004189/LS004188/LS004186等(deng)產品相比細胞成活率更高，詳(xiang)見下(xia)文或咨詢銷售人員(yuan)。
訂購信息

保存方法(fa)
　　4℃保存，保質期一年。
使用方(fang)法(fa)
1.膠原酶儲存液的配制
向每管100 mg的(de)膠原酶中加入100 μL的含(han)Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平*鹽溶(rong)液(ye)，含Ca²⁺、Mg²⁺），輕輕旋渦(wo)震蕩使其充分溶解(jie)，制備成1 g/mL（即1000×）的儲存(cun)液。然后(hou)(hou)用低(di)蛋白結合(he)性的0.22μm的濾膜過濾除(chu)菌(jun)，分裝成小份量，然后(hou)(hou)于(yu)-20℃避(bi)光凍存(cun)。
使(shi)用前于冰上解凍，避免反復凍融。其用于組織和細胞分(fen)散的常(chang)用濃(nong)度為：0.5~2.5 mg/mL，用(yong)(yong)于軟骨消化的常用(yong)(yong)濃度(du)為1~2 mg/mL，需要根(gen)據特定的(de)實驗條(tiao)件或者參考相(xiang)應的(de)文獻資料(liao)確(que)定所(suo)需的(de)合(he)適的(de)濃度。
2．組(zu)織的分離
（1）使用無菌shoushu刀或(huo)剪(jian)刀將組織切(qie)成(cheng)3~4 mm大小的組織塊。
（2）利(li)用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗(xi)滌組織(zhi)塊數(shu)次。
（3）加(jia)入(ru)足量的(de)含Ca²⁺、Mg²⁺的(de)HBSS，使其浸(jin)沒(mei)組(zu)織塊，并加(jia)入(ru)膠原(yuan)酶(mei)至需要工作濃(nong)度。
（4）于(yu)37℃孵育(yu)4~18 h。消(xiao)化時使用水平搖床以(yi)及用3mM的CaCl2補充(chong)消(xiao)化可以(yi)提高(gao)消(xiao)化效率。
（5）已分(fen)散開的(de)細胞可使用(yong)不銹鋼或(huo)尼(ni)龍網篩(shai)篩(shai)得，收集(ji)備用(yong)。未*解離(li)的(de)組織另外添加(jia)適量的(de)新鮮膠(jiao)原酶工(gong)作液于37℃繼續孵育。
（6）利用不含(han)膠原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次。
（7）細(xi)(xi)胞(bao)培養液重懸上述細(xi)(xi)胞(bao)，利用自動細(xi)(xi)胞(bao)計(ji)數器(qi)或其他方法計(ji)算(suan)活(huo)細(xi)(xi)胞(bao)密度。
（8）于細胞(bao)培養皿上(shang)利用合適細胞(bao)培養基接種細胞(bao)。
3．器官灌注(zhu)
（1）向37℃預熱的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入膠原(yuan)酶，另添加3 mM的CaCl₂有助于提(ti)高分離效率。
（2）按照已(yi)優化(hua)的速率對相應的器官灌注膠原酶工作液(ye)。
（3）將上述過程中回(hui)收的灌注液(ye)流經不銹鋼或(huo)尼龍網篩，從而將已(yi)解離(li)的細胞或(huo)小(xiao)片段組(zu)織塊與較大團塊分離(li)開來，未(wei)充分解離(li)的組(zu)織需利用新鮮膠原(yuan)酶工作液(ye)于(yu)37℃進一步孵育。
（4）利用不含(han)膠(jiao)原酶的HBSS洗滌收集的細胞數次(ci)。
（5）細胞(bao)培養液重懸上述(shu)細胞(bao)，利用自動細胞(bao)計(ji)數器或其(qi)他方(fang)法計(ji)算(suan)活細胞(bao)密度。
（6）于細(xi)胞培養皿上利用合適(shi)細(xi)胞培養基接種細(xi)胞。