EZ ECL plus化學發光液（增強型）

產品描(miao)述
EZ ECL plus化學發光液（增強型）是一款高靈(ling)敏度的(de)化(hua)學(xue)發(fa)光(ECL)HRP底物(wu)，可幫助(zhu)用戶在(zai)免(mian)疫印跡(ji)分析過(guo)程中(zhong)實現皮克級的蛋白檢測(~1×10^-12g)，極其節省(sheng)抗體(ti)。EZ ECL 底(di)物(wu)可為使用辣根過(guo)氧化物(wu)酶(HRP)偶聯物的(de)免疫印跡實(shi)驗提供明(ming)亮的(de)信號和皮(pi)克(ke)級檢測靈敏度。該底物能夠(gou)兼容各(ge)種(zhong)膜、封閉液(ye)和寬范圍抗體稀釋液(ye)，以出色性能、通(tong)用(yong)性和高(gao)性價(jia)比，滿(man)足(zu)用(yong)戶的免疫印跡(ji)應(ying)用(yong)需求。
EZ ECL 底(di)物的特點：
• 靈敏度高：檢(jian)測硝化纖維素膜或PVDF膜上(shang)皮(pi)克級(ji)的蛋白(bai)條帶(dai)。
• 長信號持續時間(jian)：在條件(jian)優化情(qing)況下，經底(di)物孵育的印跡條帶(dai)能夠持續輸出 6~8 h 的可(ke)檢測光(guang)信(xin)號。
• 試劑穩定：試劑(ji)盒在室溫下可穩定放(fang)置長達6個(ge)月，4℃條(tiao)件(jian)下存放(fang)1年不影響使用(yong)。
建議(yi)稀釋濃度：
• 一抗濃度：建議(yi)以1mg/mL儲備液起1:1,000-1:5,000 或 0.2-1ug/mL
• 二抗濃度：建議以1mg/mL儲(chu)備液(ye)起(qi)1:20,000-1:100,000或10-50ng/mL
訂購信息

產品(pin)組分(fen)

運輸與保存
藍冰運(yun)輸。4℃避光干燥保存(cun)，有(you)效(xiao)期12個月。
使用方(fang)法

1. 取出印(yin)記膜，加入合適的(de)封(feng)閉液在溫室(shi)下(xia)孵育20~60 min，同時振(zhen)蕩(dang)，以(yi)封閉膜上非特異(yi)性(xing)蛋白(bai)結(jie)合位點。

2. 將膜從封閉液(ye)(ye)中取(qu)出，與一抗工作液(ye)(ye)在(zai)溫室孵育(yu)1 h，同時振蕩(dang)；或在28℃孵(fu)育過(guo)夜，不振蕩(dang)。

3. 將足(zu)量(liang)的(de)洗滌緩(huan)(huan)沖(chong)液加(jia)至膜(mo)上，保證緩(huan)(huan)沖(chong)液將膜(mo)*覆蓋。振蕩孵(fu)育(yu)≥5 min，更換洗滌緩沖液并重復該步驟4~6次。增加(jia)洗滌(di)(di)緩沖液(ye)體積，洗滌(di)(di)次數和洗滌(di)(di)時間有助于降(jiang)低背景信(xin)號。
   【注】：①孵育(yu)前，膜在洗滌緩(huan)沖液中的短暫淋洗會提(ti)高洗滌效率。②按前(qian)文(wen)建議的HRP標記二抗(kang)稀釋度非常重要的。

4. 將HRP標記的二抗(kang)工(gong)作(zuo)液與(yu)膜在溫室(shi)孵育1 h，同(tong)時振(zhen)蕩(dang)。

5. 重復步驟3，以除(chu)去未結合(he)的HRP標記二抗。【注】：膜與HRP標記二抗孵育后必須進行*洗滌。

6. 將A溶液與(yu)B液等(deng)比例混合，制備成(cheng)工作液。每(mei)cm²膜使(shi)用0.01~0.1 mL工作液，工作液可以(yi)在溫室下穩定8 h。
   【注】：暴露于日(ri)光或(huo)其他強光下可能損害工(gong)作液(ye)，為獲得最佳結果，請(qing)將此工(gong)作液保存在琥(hu)珀色瓶中光(guang)；實驗室的常見照明不(bu)會損害工(gong)作液(ye)。

7. 將印記膜在(zai)工作液(ye)中孵育5 min。從工作液中取(qu)出印記膜，并置(zhi)于一個塑料片或(huo)清(qing)潔(jie)的塑料紙（膜）中，用一張吸(xi)水(shui)紙吸(xi)除多余(yu)的液體，并從印記和塑料紙之間小心地壓(ya)出氣泡。

8. 將(jiang)包在塑料(liao)紙（膜(mo)）中的印記(ji)膜(mo)置于膠(jiao)片(pian)暗盒(he)中，蛋白質面朝上，除(chu)適用于膠(jiao)片(pian)曝光的燈(deng)（如紅色安全燈(deng)）之外，關閉(bi)所有的燈(deng)。
   【注】：①膠片必須在曝(pu)光期間保持干燥；②確保將多(duo)余的底物(wu)從膜和塑(su)料紙上*去除；③在整個膠片處理期間，使用手套。

9. 將X光膠片置于膜(mo)的上面。建議第(di)一次曝光60 s。之后可調整曝光時間以達到最(zui)佳結果。化學發光反應在底(di)物孵育后的(de)前5~30 min期間是強(qiang)烈的。這一反應可以持續幾個小時，但強度會隨時間下降，如有底物孵育后較長時間后曝光，曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用磷光存儲成像設備（如Bio-Rad的分子成(cheng)像儀系統(tong)）或(huo)CCD照(zhao)相(xiang)機可(ke)能需要較(jiao)長的曝光時間(jian)。
   【注】：膠(jiao)片(pian)與膜之(zhi)間的任(ren)何(he)移(yi)動可能在膠(jiao)片(pian)上造成(cheng)人(ren)為(wei)的非特(te)異(yi)信(xin)號。

10. 使用合適的(de)顯影(ying)劑和(he)定影(ying)劑對膠(jiao)片(pian)進行(xing)顯影(ying)。如果信號(hao)太強，則縮短曝光時(shi)間或將印記膜(mo)進行(xing)剝離并降低抗體濃(nong)度重新檢測。

注意事項

1. 本(ben)產品僅限于科學實驗研(yan)究(jiu)使用，不得(de)用于臨床診斷、治療等領域(yu)。

2. 為獲得(de)最佳效果，必須優化該系統的全部組分，包(bao)括(kuo)樣品量(liang)、一抗和二(er)抗濃度以及膜和封閉試(shi)劑的類型。該底物極其(qi)敏感(gan)，自(zi)測李記底物正常使用比大多數(shu)他牌底(di)物少得多的樣品、一抗(kang)、二(er)抗(kang)。

3. 使用(yong)本產品比使用沉淀比色HRP底物檢(jian)測所(suo)需的(de)抗體(ti)濃度低。為優(you)化抗體(ti)濃度，請進行一(yi)次系統的(de)點(dian)印(yin)跡分(fen)析。

4. 沒有一(yi)(yi)(yi)種(zhong)封閉試(shi)劑對所有系統而言都(dou)是(shi)最佳(jia)的，所以為每一(yi)(yi)(yi)個免疫(yi)印跡檢測(ce)系統找到最合(he)適的封閉緩(huan)沖(chong)液非(fei)常必需。封閉試(shi)劑有可能與抗(kang)體(ti)產生交(jiao)叉(cha)反應，導(dao)致(zhi)出現非(fei)特(te)異(yi)性信號。封閉緩(huan)沖(chong)液同時也會影響系統的靈敏性。當從一(yi)(yi)(yi)種(zhong)底物轉換為另一(yi)(yi)(yi)種(zhong)底物時，有時會出現信號衰減或背景增加的現象，原因(yin)可能是(shi)封閉緩(huan)沖(chong)液不適合(he)新(xin)的檢測(ce)系統。

5. 使(shi)用親和素/生(sheng)*素檢測系統時，避免使用(yong)牛(niu)奶作(zuo)為(wei)封(feng)閉試劑，因為(wei)牛(niu)奶中含有不定量的(de)內源(yuan)性(xing)生(sheng)*素，會導致高背景信號。

6. 保證洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)(ye)、封閉(bi)緩沖液(ye)(ye)、抗體溶(rong)液(ye)(ye)和底(di)物工作(zuo)液(ye)(ye)的使(shi)用體積(ji)，以確保在整個實驗過(guo)程中印(yin)跡(ji)膜*被液(ye)(ye)體覆蓋，避免膜變干。增(zeng)大封閉(bi)緩沖液(ye)(ye)及洗(xi)滌(di)緩沖液(ye)(ye)的使(shi)用量可以降(jiang)低(di)非(fei)特異性的信號。

7. 為(wei)獲(huo)得最佳(jia)效果，在(zai)孵育步驟請(qing)使(shi)用搖床。

8. 將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加入封閉緩沖液(ye)和稀釋的抗(kang)體溶(rong)液(ye)，以降低(di)非特異信號。使用高品(pin)質(zhi)的產品(pin)，如去污劑。它保(bao)存在安瓿中，過氧化物和其他(ta)雜質(zhi)含(han)量(liang)很低(di)。

9. 不要使(shi)用(yong)疊氮(dan)鈉作為(wei)緩沖(chong)液的(de)防腐劑(ji)。疊氮(dan)鈉是HRP的抑制。

10. 避免手與膜直(zhi)接接觸，實驗(yan)過程應戴手套或使用(yong)干凈的鑷子。

11. 所有(you)設備必須清潔且不沾染外(wai)來物質。金屬器械（如(ru)剪(jian)刀）不得具(ju)有(you)可見的銹跡(ji)。銹跡(ji)可能導致(zhi)斑點形成和高背景。

12. 底物(wu)工(gong)作液在室溫下可穩定8 h。日光或任(ren)何其他強(qiang)光下可(ke)能損(sun)害底物(wu)，為獲得最佳(jia)結果，將底物(wu)工作(zuo)液保(bao)存在琥珀色瓶中，并避免長期暴漏(lou)在任(ren)何強(qiang)光下，短時(shi)間暴漏(lou)于(yu)實驗室常規照明不會損(sun)害該工作(zuo)液。
    
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