2022年7月22日，上海科技大學生命學院池天課題組，在線發表學術論文“Large-Scale Multiplexed Mosaic CRISPR Perturbation in the Whole Organism"（最新影響因子：66.850）。

　　生命學院池天課題組2016級博士劉波（已畢業）、2018級博士生荊征宇、2019級博士生張校銘、2014級博士陳玉鑫（已畢業）、2015級博士毛少帥（已畢業）為(wei)本文共同(tong)第(di)一作者。

　　池天教授為通訊作者。

　　上海科技大學為第一完成單位。本工作得到孫建龍、林照博、黃行許實驗室的幫助。

文章簡介

　　本篇文章報道了一種嶄新的小鼠基因打靶技術iMAP（inducible Mosaic Animal for Perturbation），快速鑒定了90個基因在39種組織的基本功能，構建了世界首張小鼠“擾動圖譜"。

　　早在2001年，國際人類基因組計劃就公布了人類基因組序列。但目前為止，約兩萬個哺乳動物蛋白編碼基因在500多種細胞中的功能仍鮮為人知。要解碼這些基因的細胞特異性功能，必須將其分別在各種細胞中敲除（擾動）再鑒定其細胞表型，即描繪“擾動圖譜"。但用傳統的基因打靶方法，無法快速有效地描繪擾動圖譜，成為功能基因組學領域久攻不下的瓶頸。池天課題組的成果為突破上述瓶頸、系統性解碼全部基因在各種細胞中的功能，邁出了(le)關鍵一步。

　　iMAP融合了Cre-loxP和CRISPR-Cas9技術(shu)，其(qi)核心組(zu)成部分是一(yi)個轉(zhuan)基因(yin)序列，它由(you)U6啟動(dong)子和下游一(yi)串gRNA表達(da)單位構成。轉(zhuan)基因(yin)通常只表達(da)第?個sgRNA，而利用(yong)藥物（他莫昔芬(fen)）激(ji)活(huo)Cre，導致轉(zhuan)基因(yin)重(zhong)組(zu)，可使其(qi)余的(de)(de)sgRNA也得以表達(da)，但每(mei)個細(xi)胞(bao)只隨機表達(da)其(qi)中?個。這些sgRNA可在Cas9的(de)(de)幫助下敲除相應(ying)的(de)(de)靶基因(yin)，從而將小(xiao)鼠(shu)轉(zhuan)化(hua)為嵌(qian)合體。利用(yong)這種嵌(qian)合體，可同時鑒定多個基因(yin)分別在多種細(xi)胞(bao)里(li)的(de)(de)功(gong)能，也可衍生出多種傳統的(de)(de)單基因(yin)敲除品(pin)系用(yong)于后續實驗。

圖1. iMAP原理

　　研究團隊首先構建了一個iMAP品系，它攜帶61個gRNA 表達單位，共靶向6個功能已知的標志基因。該品系證明了iMAP的魯棒性，包括展示轉基因起碼能穩定傳13代。隨后構建的iMAP品系攜帶100個gRNA表達單位，靶向90個功能不甚清晰的基因，以此構建了一個微型擾動圖譜，揭示了這90個基因分別在39個組織/細胞中對細胞存活、擴增、分化的影響。

圖(tu)2. 微型擾動圖(tu)譜。展(zhan)示100個sgRNA分別(bie)在39個組織/細(xi)胞類型中的豐(feng)度

　　研究團隊還進一步通過簡單的配繁，從iMAP鼠衍生出多個傳統的單基因敲除品系，證明了iMAP 的另一重要用途。

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——以上圖片截自期刊
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