EZ ECL 化學(xue)發光(guang)液（普通型）

產(chan)品描述
EZ ECL 化學發光液（普通型(xing)）是一款常規(gui)靈敏度的化學(xue)發光(ECL)HRP底物，可幫助用戶在免疫印跡分析(xi)過(guo)程中實現10pg的蛋白(bai)檢測(ce)(~1×10^-11g)，極其節省抗體。EZ ECL 底物可為使用辣根過氧化物酶(HRP)偶聯物的免疫印跡實驗提供明亮的信號和皮克級檢測靈敏度。該底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價比，滿足用戶的免疫印跡應用需求。
EZ ECL 底(di)物(wu)的(de)特點(dian)：
• 常(chang)規靈敏度(du)：檢測硝(xiao)化纖維素膜(mo)或(huo)PVDF膜(mo)上(shang)10pg的蛋白條帶。。
• 長信號持(chi)(chi)續(xu)時(shi)間：在條件優化(hua)情況下，經底物(wu)孵育的印跡(ji)條帶能夠持(chi)(chi)續(xu)輸出 6~8 h 的可檢測光信號。
• 試劑穩定(ding)：試劑盒在室溫下可穩定(ding)放置(zhi)長達6個月，4℃條件下存放1年(nian)不影響使用。
建議稀釋濃度：
• 一抗濃(nong)度：建議以(yi)1mg/mL儲備液起1:1,000-1:5,000 或(huo) 0.2-1ug/mL
• 二(er)抗(kang)濃度：建(jian)議以1mg/mL儲備液起1:5,000-1:20,000 或 2.5-10ng
訂購(gou)信息

產(chan)品組(zu)分

運輸與保存
藍冰(bing)運輸(shu)。4℃避光干燥保存，有效期12個月。
使用方法

1. 取出印記膜，加入合(he)適(shi)的(de)封閉液在溫室下孵育(yu)20~60min，同時振(zhen)蕩(dang)，以封閉膜上非特異性(xing)蛋白結合(he)位點。

2. 將膜從封閉液中取出，與一抗工作液在溫(wen)室孵育(yu)1 h，同時振(zhen)蕩(dang)；或在28℃ 孵育(yu)過夜，不振(zhen)蕩(dang)。

3. 將足量的(de)洗(xi)滌緩沖液加至膜(mo)上，保證緩沖液將膜(mo)覆蓋(gai)。振蕩孵(fu)育(yu)≥5 min，更換洗(xi)滌緩沖液并重復該(gai)步(bu)驟4~6次。增加洗(xi)滌緩沖液體積，洗(xi)滌次數和(he)洗(xi)滌時間有助于降低背景信號(hao)。【注】：①孵(fu)育(yu)前，膜(mo)在洗(xi)滌緩沖液中的(de)短暫淋洗(xi)會(hui)提(ti)高洗(xi)滌效率。②按前文建議的(de)HRP標記二(er)抗稀釋度非常重要的(de)。

4. 將HRP標記的二(er)抗工作液與膜在溫室(shi)孵(fu)育1 h，同時振(zhen)蕩。

5. 重(zhong)復步驟(zou)3，以除去未結合的HRP標記二抗。【注(zhu)】：膜(mo)與HRP標記二抗孵育后必須(xu)進行洗滌(di)。

6. 將A溶液與B液等比例混合，制備成工作液。每cm²膜使用0.01~0.1 mL工作液，工作液可以在溫室下穩定8 h。【注】：暴露于日光或其他強光下可能損害工作液，為獲得最佳結果，請將此工作液保存在琥珀色瓶中光；實驗室的常見照明不會損害工作液。

7. 將印(yin)(yin)記膜在工(gong)作液(ye)中(zhong)孵育(yu)5 min。從工(gong)作液(ye)中(zhong)取出印(yin)(yin)記膜，并置于一(yi)個塑料片或清潔的塑料紙(zhi)(zhi)（膜）中(zhong)，用一(yi)張(zhang)吸水紙(zhi)(zhi)吸除多(duo)余的液(ye)體(ti)，并從印(yin)(yin)記和(he)塑料紙(zhi)(zhi)之(zhi)間小心地壓出氣泡(pao)。

8. 將包在塑料紙（膜）中的(de)印記(ji)膜置于膠(jiao)片暗(an)盒中，蛋白質面朝上，除(chu)適用于膠(jiao)片曝光的(de)燈（如紅色安全(quan)燈）之外，關閉所有的(de)燈。【注】：①膠(jiao)片必須在曝光期(qi)間(jian)保持(chi)干燥；②確保將多(duo)余的(de)底物從膜和塑料紙上去除(chu)；③在整個膠(jiao)片處理期(qi)間(jian)，使用手套。

9. 將X光(guang)(guang)膠(jiao)片置于膜的(de)(de)(de)(de)(de)上面。建(jian)議第一(yi)次(ci)曝(pu)(pu)光(guang)(guang)60 s。之后(hou)(hou)(hou)可調整曝(pu)(pu)光(guang)(guang)時(shi)(shi)間(jian)以(yi)達到(dao)最佳結果。化(hua)學發光(guang)(guang)反應在(zai)底物(wu)孵育后(hou)(hou)(hou)的(de)(de)(de)(de)(de)前5~30 min期間(jian)是(shi)烈(lie)的(de)(de)(de)(de)(de)。這一(yi)反應可以(yi)持續幾個小時(shi)(shi)，但強(qiang)度會隨時(shi)(shi)間(jian)下降，如有(you)底物(wu)孵育后(hou)(hou)(hou)較長(chang)時(shi)(shi)間(jian)后(hou)(hou)(hou)曝(pu)(pu)光(guang)(guang)，曝(pu)(pu)光(guang)(guang)時(shi)(shi)間(jian)可能(neng)需要延長(chang)以(yi)獲(huo)得較強(qiang)信(xin)號(hao)。如果使用磷光(guang)(guang)存儲成(cheng)(cheng)像(xiang)設備（如Bio-Rad的(de)(de)(de)(de)(de)分子成(cheng)(cheng)像(xiang)儀系(xi)統）或CCD照相(xiang)機可能(neng)需要較長(chang)的(de)(de)(de)(de)(de)曝(pu)(pu)光(guang)(guang)時(shi)(shi)間(jian)。【注】：膠(jiao)片與膜之間(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)任(ren)何移動可能(neng)在(zai)膠(jiao)片上造(zao)成(cheng)(cheng)人為的(de)(de)(de)(de)(de)非(fei)特異信(xin)號(hao)。

10. 使用合適的(de)顯影劑(ji)和定影劑(ji)對膠片進行(xing)顯影。如果信號太(tai)強，則縮(suo)短曝光時間或將印記膜(mo)進行(xing)剝(bo)離并(bing)降低(di)抗體濃度(du)重新檢測。

注意事項(xiang)

1. 本(ben)產品(pin)僅限于科(ke)學(xue)實驗研究使用，不得(de)用于臨床診斷(duan)、治(zhi)療等領域。

2. 為獲得最佳效果，必須(xu)優(you)化(hua)該系(xi)統(tong)的(de)全(quan)部組分，包括(kuo)樣品量、一(yi)(yi)抗和二抗濃度以及膜和封閉試劑(ji)的(de)類型。該底(di)(di)(di)物極其(qi)敏感，自測李記底(di)(di)(di)物正(zheng)常使用比大多(duo)數他牌底(di)(di)(di)物少得多(duo)的(de)樣品、一(yi)(yi)抗、二抗。

3. 使用(yong)本產品(pin)比(bi)使用(yong)沉淀比(bi)色HRP底物檢測所需的抗體濃度(du)低。為優(you)化抗體濃度(du)，請進(jin)行一次系統的點(dian)印跡(ji)分(fen)析(xi)。

4. 沒(mei)有一(yi)種(zhong)封閉(bi)(bi)試劑對所(suo)有系(xi)統(tong)而言都是(shi)最佳的(de)(de)，所(suo)以為每一(yi)個免疫印跡檢測(ce)系(xi)統(tong)找到最合(he)適的(de)(de)封閉(bi)(bi)緩沖液非常必需。封閉(bi)(bi)試劑有可能與抗體(ti)產生交叉反應，導致出現(xian)非特(te)異性信(xin)號。封閉(bi)(bi)緩沖液同時也會影響系(xi)統(tong)的(de)(de)靈敏性。當從一(yi)種(zhong)底物(wu)轉換為另(ling)一(yi)種(zhong)底物(wu)時，有時會出現(xian)信(xin)號衰減或背(bei)景增加(jia)的(de)(de)現(xian)象，原因可能是(shi)封閉(bi)(bi)緩沖液不(bu)適合(he)新的(de)(de)檢測(ce)系(xi)統(tong)。

5. 使(shi)用親和素(su)(su)/生*素(su)(su)檢測系統時，避免使(shi)用牛奶作(zuo)為封(feng)閉(bi)試劑，因(yin)為牛奶中含有不定量的內源(yuan)性(xing)生*素(su)(su)，會(hui)導致高背景信號。

6. 保證洗(xi)滌緩沖(chong)液、封閉緩沖(chong)液、抗體溶液和底物工作液的使用(yong)體積，以確(que)保在整個實驗(yan)過程(cheng)中印跡膜(mo)被液體覆(fu)蓋，避(bi)免膜(mo)變干。增大封閉緩沖(chong)液及洗(xi)滌緩沖(chong)液的使用(yong)量可以降低非特異性的信號。

7. 為(wei)獲得最(zui)佳(jia)效(xiao)果(guo)，在孵育步驟(zou)請使用(yong)搖床。

8. 將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加入(ru)封閉緩沖液和稀釋的抗體溶液，以降低非(fei)特異信號。使(shi)用高(gao)品(pin)質的產(chan)品(pin)，如去污劑。它保存在安(an)瓿中，過氧化物和其他雜(za)質含量很低。

9. 不要(yao)使用疊(die)氮(dan)鈉作(zuo)為緩沖液的(de)防腐劑。疊(die)氮(dan)鈉是HRP的(de)抑制。

10. 避免手與(yu)膜(mo)直接接觸，實驗(yan)過程應戴手套或使用干凈的鑷(nie)子(zi)。

11. 所有設備必須清潔且不沾染(ran)外來(lai)物質。金屬器械（如(ru)剪刀）不得具有可見的銹(xiu)跡(ji)。銹(xiu)跡(ji)可能導致斑點形成和高(gao)背景。

12. 底(di)物工作液(ye)在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)可穩(wen)定8 h。日光或任何(he)(he)其他強光下(xia)可能損(sun)(sun)害底(di)物，為獲得最佳結(jie)果，將底(di)物工作液(ye)保(bao)存在(zai)琥珀色瓶中(zhong)，并(bing)避免長期暴漏在(zai)任何(he)(he)強光下(xia)，短時間(jian)暴漏于實驗室(shi)常規照明不會(hui)損(sun)(sun)害該工作液(ye)。

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