簡(jian)要描述:小麥胚芽(ya)凝(ning)集(ji)素(su),AF555標記(下文簡稱“AF555 WAG"),是一(yi)(yi)種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和(he)(he)唾(tuo)液酸結合(he)的凝(ning)集(ji)素(su),可能是明亮(liang)和(he)(he)紅(hong)色熒光(guang)中最亮(liang)的WGA綴合(he)物(wu)。它是目前研究多、應用(yong)廣泛的一(yi)(yi)類(lei)凝(ning)集(ji)素(su)。
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品牌 | Life-iLab/李記生物 | 貨號 | AC15L014 |
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供貨周期 | 現貨 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,綜合 |
產品描述(shu)
小麥胚芽凝集素, AF555標記(下文簡稱“AF555 WAG"),是一種與N-乙酰-D-葡萄糖胺和唾液酸結合的凝集素,可能是明亮和紅色熒光中最亮的WGA綴合物。它是目前研究多、應用廣泛的一類凝集素。WGA與糖綴合物結合,其衍生物和綴合物被廣泛用于標記細胞膜和纖維化瘢痕組織,用于熒光成像和分析。WGA的糖結合特異性與β-1,4-GlcNAc-連接殘基的序列,即幾丁質酶有關。每個單體包含兩個相同的非相互作用的結合位點,它們與3或4β-1,4-GlcNAc單元互補。在所檢測的單糖中,只有GlcNAc與WGA結合。甘露聚糖不結合,而GalNAc只能弱結合。WGA與含有Galβ(1--4)GlcNAcβ(1--3)重復序列(即聚乳糖胺型聚糖)的大寡糖中的內部GlcNAc殘基具有高親和力結合。N-乙酰神經氨酸只參與與WGA的低親和力相互作用。WGA顯示了復雜的糖類特異性模式,可用于復雜碳水化合物的結構分析。
技術資(zi)料
Ex (nm): | 557 | Em (nm): | 570 |
分子量: | N/A | 溶(rong)劑(ji): | Water |
訂購信息(xi)
產品名稱 | 貨號 | 規格(ge) |
小麥胚芽凝集素,AF555標記 | AC15L014 | 1mg |
運輸(shu)與(yu)保(bao)存
藍冰運輸。-20℃避光防潮保存,有效期12個月。
適用儀(yi)器
熒光顯微鏡(jing) | |
激發(fa): | Cy3/TRITC濾波片 |
發射: | Cy3/TRITC濾波片 |
推薦孔板: | 黑色透(tou)明 |
使用(yong)方法
溶(rong)液配制
1. AF555 WAG儲備溶液(200X)配制
將 500 µL ddH2O 添加到粉末小瓶中,制成 2 mg/mL 的儲備溶液。【注】:重新配制的儲備溶液可在 4℃ 下短期儲存,或在 -20℃ 下長(chang)期儲存。
2. AF555 WAG工作溶液(1X)配制
將 5 μL 200X WGA 儲備溶液添加到 1 mL HHBS 緩沖液中。【注】:不同細胞系的優化染色濃度可能不同。活細胞的推薦起始濃度為 5-10 µg/mL。
操(cao)作步驟(zou)
1. 活(huo)細胞(bao)染色
(1) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(2) 添加 100 µL AF555 WAG 工(gong)作溶液。
(3) 將細胞與AF555 WAG 工作溶液在 37°C 下孵育 10-30 min。
(4) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(5) 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
2. 固(gu)定細胞染色
(1) 在PBS中使用4%的甲醛固定細胞。【注】:對于固定細胞膜染色,建議在沒有透化步驟的情況下進行染色。固定后透化步驟會導致細胞內區室染色,如高爾基體和內質網 (ER) 結構染色。
(2) 添加 100 µL AF555 WAG 工作溶液。
(3) 在室溫下用AF555 WAG 工作溶液孵育細胞 10-30 min。
(4) 用 HHBS 緩沖液清洗細胞兩次。
(5) 使用 FITC 濾光片組在熒光顯微鏡上成像細胞。
圖示(shi)
圖 1. 使用AF555 WAG 以 5 µg/mL的濃度在活細胞(Hela細胞) 染色 30 min,然后用 Hoechst 33342(Cat# AC12L021)染色。最后使用帶Cy3/TRITC 和 DAPI 濾光片組的熒光顯微鏡成像。
注意事項
1. 本產品僅限于科學實驗研(yan)究使用(yong),不得用(yong)于臨床診斷、治療等領域。
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