產品描(miao)述(shu)
　　消化法中常使用(yong)的酶(mei)(mei)(mei)有3種：胰(yi)*白酶(mei)(mei)(mei)、膠原酶(mei)(mei)(mei)以(yi)及透(tou)明質(zhi)酸酶(mei)(mei)(mei)，透(tou)明質(zhi)酸酶(mei)(mei)(mei)多數情況下與胰(yi)*白酶(mei)(mei)(mei)或膠原酶(mei)(mei)(mei)聯(lian)合應用(yong)。胰*白酶(mei)作用較強，容易造成平滑(hua)肌細胞(bao)損壞，而膠原酶作用較緩(huan)和，能(neng)消化細胞(bao)(bao)間(jian)質中的膠原纖維以(yi)釋(shi)放細胞(bao)(bao)，對細胞(bao)(bao)損(sun)傷小(xiao)，是一種可以(yi)降解具有三股超螺(luo)旋結構的天然膠原纖維的蛋白酶。
　　膠原酶(mei)(mei)(mei)(mei)(Collagenase)從溶組(zu)織(zhi)梭菌（Clostridium histolyticum）提取的(de)一(yi)種酶(mei)(mei)(mei)(mei)粗提物，也叫梭菌蛋(dan)(dan)白酶(mei)(mei)(mei)(mei)A（clostridiopeptidase A），不僅含有膠原酶(mei)(mei)(mei)(mei)，還含有其他(ta)的(de)一(yi)些(xie)蛋(dan)(dan)*酶(mei)(mei)(mei)(mei)、多糖(tang)酶(mei)(mei)(mei)(mei)、脂酶(mei)(mei)(mei)(mei)等。這些(xie)成(cheng)分(fen)分(fen)別能夠(gou)有效水(shui)解(jie)結締組(zu)織(zhi)和上(shang)皮組(zu)織(zhi)細胞外基質內的(de)其他(ta)蛋(dan)(dan)白，多糖(tang)和脂質。該酶(mei)(mei)(mei)(mei)分(fen)離效果(guo)好，即(ji)使有鈣、鎂離子(zi)存在仍有活(huo)性，故可(ke)用PBS和含血清的(de)培養液配制(zhi)，既(ji)操作簡便又可(ke)提高細胞成(cheng)活(huo)率，終濃(nong)度200u/mL，此(ci)酶(mei)(mei)(mei)(mei)消化作用緩和，無需機械振蕩。
　　目前商業(ye)化提供的細菌膠(jiao)原酶(mei)(mei)主要根據膠(jiao)原酶(mei)(mei)活性的差異，分為四種類型(xing)：膠(jiao)原酶(mei)(mei)I型(xing)，II型(xing)，III型(xing)和IV型(xing)，在應用上(shang)有所(suo)偏向：(1)膠原酶(mei)(mei)I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶(mei)(mei)活力（包括膠原酶(mei)(mei)、酪蛋(dan)白酶(mei)(mei)、梭菌(jun)蛋(dan)白酶(mei)(mei)、胰蛋(dan)*酶(mei)(mei)活性）。通常用作上皮細胞、肝(gan)、肺、脂肪和腎(shen)上腺組織細胞的制備。(2)膠原酶(mei)II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶(mei)活性，通常(chang)用于(yu)心(xin)臟、骨、肌肉(rou)、胸腺和(he)軟骨等組織(zhi)來源細(xi)胞的制備。(3)膠原(yuan)酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋(dan)*酶活(huo)性，常(chang)用(yong)于乳腺細(xi)胞的制備(bei)。(4)Collagenase, TypeⅣ 膠原酶Ⅳ型含(han)有(you)低胰*活性(xing)，通(tong)常用于(yu)胰島細胞(bao)的制備，或者需要維持受體完整性(xing)的細胞(bao)制備實驗。
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保存(cun)方法
  4℃保(bao)存，保(bao)質期一年。
使用方法
1. 膠(jiao)原酶儲(chu)存(cun)液的配制
向每管100 mg的膠原酶中(zhong)加入100 μL的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平(ping)*鹽(yan)溶液，含Ca²⁺、Mg²⁺），輕輕旋渦(wo)震蕩使其充分溶解，制備(bei)成1 g/mL（即1000×）的(de)儲存液(ye)。然(ran)后用(yong)低蛋白結合性的(de)0.22μm的(de)濾膜過濾除菌，分(fen)裝成(cheng)小份量(liang)，然(ran)后于(yu)-20℃避光凍存。
使(shi)用前于冰上(shang)解凍，避免反復凍融(rong)。其用于組織和細胞分散的常用濃(nong)度為：0.5~2.5 mg/mL，用(yong)于(yu)軟骨消化(hua)的(de)常用(yong)濃度為(wei)1~2 mg/mL，需要根據特(te)定的(de)(de)(de)(de)實驗(yan)條件或者參考相應的(de)(de)(de)(de)文獻資料確定所需的(de)(de)(de)(de)合適的(de)(de)(de)(de)工(gong)作(zuo)濃(nong)度。
2．組(zu)織的分離
（1）使用(yong)無(wu)菌shoushu刀或剪刀將組織切成3~4 mm大小的組織(zhi)塊。
（2）利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗滌(di)組織塊數(shu)次。
（3）加(jia)入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其(qi)浸沒組織塊，并(bing)加入膠原酶至需要(yao)工作濃度。
（4）于(yu)37℃孵育4~18 h。消(xiao)化時使用(yong)水平(ping)搖(yao)床以(yi)及用(yong)3mM的CaCl2補充消(xiao)化可以(yi)提高(gao)消(xiao)化效(xiao)率。
（5）已分散開的細胞可使用不銹鋼或尼(ni)龍網篩(shai)篩(shai)得，收集備用。未*解離(li)的組(zu)織另(ling)外添(tian)加適量(liang)的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續孵育。
（6）利用不含膠(jiao)原酶(mei)的HBSS洗滌收集(ji)的細胞數次(ci)。
（7）細(xi)(xi)胞培(pei)養液重懸上述細(xi)(xi)胞，利用(yong)自動細(xi)(xi)胞計(ji)(ji)數器或其他方法計(ji)(ji)算(suan)活細(xi)(xi)胞密度(du)。

（8）于細胞培(pei)養皿上利用合適細胞培(pei)養基接種細胞。
3．器官灌注
（1）向37℃預(yu)熱(re)的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入膠原酶，另添加3 mM的CaCl₂有(you)助于提高分離效率。
（2）按照已優化的速率(lv)對相應的器官灌(guan)注膠(jiao)原(yuan)酶工作(zuo)液(ye)。
（3）將上述過程中回收的(de)灌注液(ye)流(liu)經不銹(xiu)鋼(gang)或尼(ni)龍網篩，從(cong)而(er)將已解離(li)的(de)細胞或小片段(duan)組織塊與(yu)較大團塊分離(li)開來，未充分解離(li)的(de)組織需利用新鮮膠原(yuan)酶工作液(ye)于37℃進一步孵(fu)育。
（4）利用不含膠(jiao)原酶的(de)HBSS洗滌收集的(de)細(xi)胞數次。
（5）細胞(bao)(bao)培養(yang)液重懸上述細胞(bao)(bao)，利(li)用(yong)自動(dong)細胞(bao)(bao)計數器(qi)或(huo)其他方(fang)法計算活細胞(bao)(bao)密(mi)度。
（6）于細(xi)胞培養皿上利(li)用合適細(xi)胞培養基接種細(xi)胞。
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