產品描(miao)述
　　Quick Cell支原體快速(su)檢測(ce)試(shi)劑盒(細胞(bao)培養)是專門用于快速檢測(ce)細(xi)胞培養上(shang)清(qing)或別的液體(ti)樣(yang)品(如(ru)血清(qing))中是否存(cun)在(zai)支原體(ti)污染的試劑。本(ben)試劑盒操作簡單，反應(ying)時(shi)間(jian)短(duan)，只需吸取1 μl細胞培養(yang)上清加入反應體(ti)系中，60℃孵育1h，肉眼(yan)觀察(cha)即可判定結果，與傳統檢測(ce)支原體的PCR法優勢(shi)明(ming)顯(xian)。本試劑盒檢(jian)(jian)測范(fan)圍廣，可以檢(jian)(jian)測：(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等(deng)幾乎所(suo)有常(chang)見的污(wu)染細(xi)胞的支原體(M.為(wei)Mycoplasma的(de)縮寫)。以上13種支原體約(yue)占細胞支原體污染(ran)的(de)99%以上。絕大多數支原體污染集中于前8種。因此(ci)非常適(shi)合于與細(xi)胞生物學相關的(de)科研實驗室及企(qi)業的(de)日(ri)常支原體檢測。【注】：快速法不(bu)能檢(jian)測尿解，肺支原體。
訂購信息

產品組(zu)分

【注】：①本試(shi)(shi)(shi)劑(ji)盒所指50次測試(shi)(shi)(shi)包含陰性(xing)對照、陽性(xing)對照，并非50個樣品，因每次測試(shi)(shi)(shi)均需設置(zhi)對照，測試(shi)(shi)(shi)樣品數根據實驗安排確定，理論上一(yi)次最(zui)多可測試(shi)(shi)(shi)48個樣品。②使用(yong)前用(yong)離心機輕微離心，以免管壁上粘附(fu)損失(shi)試(shi)(shi)(shi)劑(ji)減少檢測次數。 （注：陽性(xing)支原體DNA無(wu)需離心。)
運輸(shu)與(yu)保存
藍冰運輸(shu)。-20℃保存，有效期36個月。
實驗操作流程
1.待測(ce)細胞培養上清收集
為了(le)準確判(pan)斷細(xi)胞是否有(you)支原(yuan)體的污染，待(dai)測的細(xi)胞培(pei)養液樣(yang)品(pin)最好來(lai)源于至少培(pei)養3 d且匯(hui)合度70-90%左(zuo)右(you)的(de)細(xi)胞(bao)培養上清(貼壁細(xi)胞(bao))。懸浮培養的(de)細(xi)胞(bao)也需(xu)要(yao)在(zai)換液傳代后，至少讓細(xi)胞(bao)生長3 d再取培養液(ye)進行檢測，哺乳動物細(xi)胞(bao)(bao)的存在不會(hui)影(ying)響(xiang)檢測結果。細(xi)胞(bao)(bao)培養上清可直(zhi)接用(yong)于檢測，但樣(yang)品(pin)中如(ru)果含有EDTA等影(ying)響(xiang)支原體DNA擴增的成分，建議進行樣(yang)品(pin)處(chu)理，處(chu)理過程(cheng)如(ru)下：
樣品處理：（1）根據(ju)濃縮倍(bei)數，可以取(qu)100-1500μL上(shang)(shang)述待(dai)測樣品到(dao)(dao)1.5 mL離(li)(li)心(xin)(xin)管(guan)內(nei)，在(zai)普通臺(tai)式離(li)(li)心(xin)(xin)機上(shang)(shang)1000 rpm低速(su)離(li)(li)心(xin)(xin)5 min，將離(li)(li)心(xin)(xin)后的(de)上(shang)(shang)清(qing)(qing)轉移到(dao)(dao)另(ling)一個離(li)(li)心(xin)(xin)管(guan)內(nei)，丟棄細(xi)胞沉淀。（2）將上(shang)(shang)清(qing)(qing)繼續(xu)13000 rpm（約 16000 g）高速(su)離(li)(li)心(xin)(xin) 5 min，小心(xin)(xin)吸走全部上(shang)(shang)清(qing)(qing)，用 50 μL 5 mM Tris-HCl, pH 8.5（樣品可以長(chang)期保(bao)存。推薦）或(huo)者(zhe)去離(li)(li)子水(shui)重懸(xuan)沉淀（沉淀中含有支原體），吹吸均(jun)勻（如(ru)果(guo)最初使(shi)用了(le)1500 μL 的(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)，則支(zhi)原(yuan)體(ti)濃度大約提高了(le)30倍）。（3）該重(zhong)懸后的(de)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)可以(yi)直(zhi)接檢測(ce)，也可以(yi)進(jin)行熱(re)(re)(re)(re)處(chu)理(li)后再檢測(ce)（熱(re)(re)(re)(re)處(chu)理(li)后，樣(yang)(yang)品(pin)(pin)保存更穩(wen)定）。熱(re)(re)(re)(re)處(chu)理(li)過程：95 ℃加熱(re)(re)(re)(re)處(chu)理(li) 5 min（可以(yi)轉移到(dao) PCR 管內，在 PCR 儀上進(jin)行加熱(re)(re)(re)(re)處(chu)理(li)），簡單(dan)離心（1000 g，5 sec）后，取上清(qing)進(jin)行檢測(ce)。
【注】：收集的待測細胞(bao)培養液樣(yang)品(pin)如果不(bu)立即(ji)檢測，請(qing)放于-20℃或-80℃冰箱保存，不(bu)得放于室溫(wen)或4℃冰箱。樣(yang)品(pin)在(zai)-20℃至少可(ke)以保存1個(ge)月，在(zai)-80℃可以(yi)長(chang)期保存(cun)。此外，為了(le)節約檢測成(cheng)本，可以(yi)將不同時間(jian)收集的(de)樣(yang)品放于-20℃或-80℃冰箱保存(cun)，而后一起檢測。
2.反應體系的配制
表(biao)1：恒溫反(fan)應體系(xi)的配(pei)制(zhi)

（1）將溶(rong)液Ⅰ、溶(rong)液Ⅲ從(cong)-20℃冰(bing)箱(xiang)中取(qu)出，室溫(wen)放(fang)置待其融化，溶(rong)液Ⅱ從(cong)-20℃冰(bing)箱(xiang)中取(qu)出后置于冰(bing)上備用。溶(rong)液Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000rpm離心(xin)30 sec，用移液槍吹(chui)洗(xi)均勻。三種試劑按表1比例混(hun)合。
【舉例】：①如果待測樣品為8個（加上1個陰(yin)性和1個陽性對照(zhao)），則樣品總數(shu)為10個。溶(rong)液Ⅰ的(de)總(zong)體(ti)積(ji)為22.5×10×1.06=238.50 μL。溶(rong)液(ye)Ⅱ的(de)總(zong)體(ti)積(ji)為1×10×1.06=10.60 μL。溶(rong)液(ye)Ⅲ的(de)總(zong)體(ti)積(ji)為0.5×10×1.06=5.3 μL。將溶(rong)液(ye)Ⅰ、溶(rong)液(ye)Ⅱ和溶(rong)液(ye)Ⅲ混合均勻即可。②如果打算一個試(shi)劑盒(he)一次使用完畢，可以按照以下方法進行配制：直接往整管溶(rong)液(ye)Ⅰ（1150 μL）中加入(ru)50 μL 溶液Ⅱ和25 μL溶液Ⅲ，混合均(jun)勻即可。如果一(yi)次使(shi)用完畢(bi)，一(yi)個試劑(ji)盒(he)大概(gai)可以檢測48-49個樣品(pin)。
【注】：①總體(ti)積中多(duo)配制6%（如果(guo)覺得該比例不合適，可以自己調整），是為了(le)防止(zhi)移液(ye)(ye)誤差，以保(bao)證每個反應管中的反應液(ye)(ye)足量。②溶液Ⅰ和溶液(ye)Ⅲ使用完(wan)后，請(qing)繼續放回(hui)-20 ℃冰(bing)箱中保存(cun)。③溶液Ⅱ必(bi)須一直在-20 ℃冰箱中保存（溶液(ye)Ⅱ在-20 ℃不會凍(dong)住），不能放(fang)于室溫。④溶(rong)液(ye)Ⅱ和溶(rong)液(ye)Ⅲ開蓋之前，請(qing)離心一下。
（2）將上述配制好的反(fan)應體(ti)系，吹打均勻(yun)后，按每(mei)管24 μL分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量(liang)保(bao)證每(mei)管的反(fan)應液體(ti)積一樣。PCR管應該使用透明度良好的薄壁PCR管。
（3）往測試管(guan)(Test)中加入1μL待測細胞培養液；往陽性(xing)(xing)對(dui)照管(guan)(Positive)中加入1 μL陽性(xing)(xing)支原(yuan)體DNA；往陰性(xing)(xing)對(dui)照管(guan)(Negative)中加入1μL滅菌水；反應(ying)液的總體積為25 μL。
【注】：①裝有陽性支(zhi)原體(ti)DNA的螺口管開蓋之前，用力甩一下，或(huo)者用迷你(ni)離心機即(ji)可。
②進行反應體系配(pei)制的(de)房間，與進行樣(yang)品前處(chu)理、加陽(yang)性對照DNA、樣(yang)品DNA的(de)房間最好分開。

3. 反應(ying)
PCR儀設置(zhi)程序：61℃，60 min；10℃，forever；熱蓋溫度(du)，105℃。
【注】：若實驗(yan)室(shi)反(fan)(fan)應(ying)場(chang)所沒(mei)有PCR儀，可用水浴鍋(guo)代替，水浴鍋(guo)顯示溫度與(yu)實際溫度的(de)溫差(cha)不超過0.5℃，另須往每(mei)個反(fan)(fan)應(ying)管內加入25μL礦物(wu)油，以防止(zhi)水份揮發，然后蓋(gai)上蓋(gai)子，將反(fan)(fan)應(ying)管插入帶(dai)孔的(de)漂板內，放入已經升溫到61℃的(de)水浴內，準(zhun)確反(fan)(fan)應(ying)60 min。
4. 結果判(pan)斷
61℃反應60 min后，立刻(ke)取(qu)出(chu)反應(ying)管(guan)，放于室溫。以一張白紙或白色(se)(se)泡沫盒為背景，通(tong)過反應(ying)管(guan)溶(rong)液(ye)顏色(se)(se)的變化，即可判斷檢測結果(guo)。如果(guo)溶(rong)液(ye)為藍(lan)綠(lv)色(se)(se)，則說(shuo)(shuo)明有支原(yuan)體污染；如果(guo)為紫紅色(se)(se)，則說(shuo)(shuo)明沒有支原(yuan)體污染(如圖(tu)1)。
【注(zhu)】：如果(guo)(guo)反應60 min，陽(yang)性對照效果(guo)(guo)不(bu)明(ming)顯(xian)，可以繼續反應10 min。

               

產品圖片

注意事項

1.該產品僅限于科學(xue)實驗(yan)研究使用，不得用于臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷(duan)、治療等(deng)領域。
2.必須確保使用的(de)移液槍本身沒有殘留的(de)支原(yuan)體(ti)，盡量用新購移液器、新開(kai)封(feng)的(de)槍頭操作(zuo)(zuo)。整個操作(zuo)(zuo)過程，佩戴kouzhao不要開(kai)口說話(hua)。由(you)于本試劑盒非(fei)常靈敏(min)，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原(yuan)體(ti)均有可能造成假陽(yang)性。
3.最好(hao)使(shi)用帶(dai)濾(lv)芯的(de)吸頭(tou)(tou)吸取(qu)溶液和陽性支(zhi)原體等(deng)。如果(guo)沒有帶(dai)濾(lv)芯的(de)吸頭(tou)(tou)，至少應(ying)該(gai)使(shi)用新(xin)開(kai)封的(de)吸頭(tou)(tou)。
4.檢測過(guo)(guo)程(cheng)中(zhong)，用過(guo)(guo)的(de)(de)各類吸頭(tou)、離(li)心(xin)管務必小心(xin)處理，應裝入含有半瓶水的(de)(de)帶(dai)蓋的(de)(de)、可密封的(de)(de)垃圾瓶內。反應后的(de)(de)PCR管，不(bu)要開蓋，用過后將其用自封袋密閉，扔(reng)到遠離細胞房的獨立垃圾(ji)桶內。
5.如果細(xi)胞被支(zhi)原體污染，可以選(xuan)購本公(gong)司或其他供(gong)應商提(ti)供(gong)的(de)去除試劑(ji)盡(jin)早去除。
6.如待測樣品(pin)是低溫保(bao)存(cun)的血漿、血清、臍帶血、胰酶、抗(kang)生素、未使用的培(pei)養液等(deng)，這類樣品(pin)中支(zhi)原體含(han)量較(jiao)低，為(wei)了保(bao)證支(zhi)原體DNA的檢出(chu)率，可通(tong)過離心濃縮提高樣品(pin)DNA濃度，再進(jin)行檢測。

7.如果反應(ying)后(hou)，發現個別(bie)樣品的(de)顏色介于陽(yang)性(xing)和陰(yin)性(xing)之(zhi)間(jian)（正常這(zhe)種情況應(ying)該概率很低，如果經常出現，樣品中可(ke)能含有可(ke)干擾正常指示效果的(de)物質，必須先去除。），可(ke)以將這(zhe)些樣品繼續 61℃反應(ying) 10  min。10  min后(hou)，如果其顏色仍然(ran)與陽(yang)性(xing)對(dui)照(zhao)的(de)顏色不同，該樣品應(ying)該判為陰(yin)性(xing)。這(zhe)種可(ke)疑樣品建(jian)議用(yong)相同試(shi)劑(ji)盒(he)或者不同原(yuan)理的(de)其他(ta)試(shi)劑(ji)盒(he)（如本公司的(de)《PCR 法(fa)支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)》貨(huo)(huo)號(hao)：AC16L064、《發光法(fa)支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)》貨(huo)(huo)號(hao)：AC16L062 、《探針法(fa)支(zhi)原(yuan)體(ti)檢測試(shi)劑(ji)盒(he)》貨(huo)(huo)號(hao)：AC16L068）進行(xing)復(fu)檢。
8.反應后，請勿打開反應管的蓋子，否則有可能造成檢測環境的污染。
表2：Quick Cell 支原體快速檢測試劑盒(細胞培養專用)的優勢

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