Hoechst 33342 *超級純*

產品描述

Hoechst 33342是一種可(ke)以穿(chuan)透細胞(bao)膜的藍色(se)熒(ying)光染料，對細胞(bao)的毒性較低，在嵌入雙(shuang)鏈(lian)DNA后釋(shi)放(fang)強烈(lie)的藍色(se)熒光。Hoechst 系列染料因與DNA結合的特性，也(ye)常被(bei)用(yong)來進行線粒體DNA的觀察。

Hoechst33258和Hoechst33342是兩種非常相近的Hoechst染(ran)料，他們都在紫外(wai)段350 nm被激(ji)發(fa)，發(fa)射波長都為461 nm，兩種染料經常被用來替代另一種熒光染料DAPI. Hoechst 33342比33258具有(you)更強的親脂(zhi)性，因此能更好的透過(guo)完整的細胞(bao)膜，在部分實(shi)驗中(zhong)Hoechst33258的細(xi)胞透過性存在(zai)明(ming)顯不足。用于細(xi)胞核染色時，推薦的Hoechst 33342工作終濃度(du)為0.5～5 μM，在一些(xie)敏感(gan)性實驗時(shi)，建議設(she)置(zhi)多個染色(se)濃度，以獲得(de)需(xu)要的染色(se)效果。

訂購信息(xi)

技術參數

　　光學性質：Ex(nm)：350      Em(nm)：461

　　化學參數：分子量：561.93  溶(rong)劑：Water        CAS：23491-52-3

保存方法

　　冰袋（wet ice）運輸(shu)，-20℃干燥避光保存，保質期(qi)12個月。

使用方法

1. 緩沖(chong)液制備(bei)。用PBS或合適的緩沖(chong)液制(zhi)備(bei)10～50 μM Hoechst 33342染色液。李記生物(wu)也(ye)提(ti)供配制(zhi)好(hao)的20 mM Hoechst 33342（CAT:AC12L021）產品，既方便存(cun)放(fang)，以方便稀(xi)釋備用。

2. 固(gu)定(ding)(ding)的細胞(bao)(bao)或組織(zhi)染色(se)(se)。對于(yu)固(gu)定(ding)(ding)的細胞(bao)(bao)或組織(zhi)樣品，固(gu)定(ding)(ding)后，適當洗滌(di)去除固(gu)定(ding)(ding)劑。依次按步驟進行(xing)免疫(yi)熒(ying)光染色(se)(se)，和Hoechst33342染色(se)。如果不(bu)進(jin)行免(mian)疫熒光染色(se)，則直(zhi)接按步驟進(jin)行Hoechst33342染色。

（1）對于貼(tie)壁細胞或(huo)組織切片：加入(ru)適量Hoechst 33342染色液，覆蓋住樣品(pin)即可。對于懸浮細胞(bao)：至少(shao)加入待測(ce)染色樣品(pin)體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3~5 min。

（2）吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生(sheng)理鹽水洗(xi)滌2~3次(ci)，每(mei)次(ci)3~5 min。

（3）直接在熒(ying)光顯(xian)(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)或封片(pian)后(hou)熒(ying)光顯(xian)(xian)微鏡下(xia)觀察(cha)。激(ji)發波(bo)長(chang)350 nm，發射波長461 nm。

3. 活細胞或組織染色

（1）細(xi)胞培(pei)養(yang)物中加入(ru)適(shi)量(liang)Hoechst 33342染色液，約(yue)1/10細胞培養基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六(liu)孔板一個孔需加入1 mL染色液，對于96孔板一個孔需(xu)加入100 μL染(ran)色液。

（2）在37℃培養細胞(bao)10～20 min。

（3）用PBS或合適的緩(huan)沖(chong)液洗細胞兩次。

（4）直接在熒光顯微(wei)鏡下觀察或封(feng)片后熒光顯微(wei)鏡下觀察。激發波長350 nm，發射(she)波長461 nm。

注意(yi)事項

1. Hoechst 33342溶于水，溶解度(du)可(ke)達20mM(約10mg/ml)。您也可(ke)直接購(gou)買(mai)20 mM的(de)液(ye)體規格產品（貨號:AC12L021）。

2. Hoechst 33342對人體有一定刺激性，請注意適當防護(hu)。

3. 熒光染(ran)料都存在淬滅的問題(ti)，建議染(ran)色后盡量當天完成檢測。

4. 為減緩熒(ying)光淬滅可以使用(yong)抗熒(ying)光淬滅封片液。