EZ ECL pico化學發光液（超敏型）?

1. 取出印記膜，加入合適(shi)的封(feng)閉(bi)液在溫室(shi)下孵育(yu)20~60 min，同時振蕩(dang)，以封閉(bi)膜上非特(te)異性蛋白結合位(wei)點。

2. 將(jiang)膜從封閉液中取出，與一(yi)抗(kang)工作(zuo)液在溫(wen)室(shi)孵育1 h，同(tong)時振蕩；或在28℃孵育過夜，不振蕩。

3. 將(jiang)足(zu)量(liang)的洗滌(di)緩沖(chong)液(ye)加至(zhi)膜上，保證緩沖(chong)液(ye)將(jiang)膜*覆蓋。振蕩孵(fu)育≥5 min，更換(huan)洗滌(di)緩沖(chong)液并重(zhong)復該步驟4~6次。增加(jia)洗滌(di)(di)緩沖液體積，洗滌(di)(di)次數和洗滌(di)(di)時間有助于(yu)降低背景信號。
   【注】：①孵育(yu)前，膜在洗(xi)滌緩沖液(ye)中(zhong)的短暫(zan)淋洗(xi)會提高洗(xi)滌效率。②按前文建議的HRP標(biao)記二抗稀釋度非(fei)常重要(yao)的。

4. 將HRP標(biao)記的(de)二(er)抗工作液與(yu)膜(mo)在溫室(shi)孵育1 h，同(tong)時振(zhen)蕩。

5. 重復步驟3，以除去未結合的HRP標記二抗。【注】：膜與HRP標記(ji)二抗孵(fu)育后必須進(jin)行*洗滌。

6. 將A溶液與B液等比例(li)混合，制備成工作液。每cm²膜使用0.01~0.1 mL工作液(ye)，工作液(ye)可以(yi)在溫室下(xia)穩(wen)定8 h。
   【注】：暴露(lu)于日光或其他(ta)強光下可能損害工作液，為獲得最(zui)佳結果，請將此工(gong)作液(ye)保存在琥珀(po)色瓶(ping)中光(guang)；實(shi)驗室的常(chang)見照明不(bu)會損害(hai)工作液。

7. 將印記膜在工(gong)作液中孵育5 min。從工(gong)作液(ye)中取出(chu)印記(ji)膜(mo)，并置于一個塑料(liao)片或清潔的(de)塑料(liao)紙(zhi)（膜(mo)）中，用一張吸水(shui)紙(zhi)吸除多(duo)余的(de)液(ye)體，并從印記(ji)和塑料(liao)紙(zhi)之間小心地(di)壓出(chu)氣泡。

8. 將包在塑料(liao)紙（膜(mo)）中的(de)印記膜(mo)置于膠片暗盒中，蛋白質面朝上，除適用(yong)于膠片曝光的(de)燈(deng)（如紅色安全燈(deng)）之外，關閉(bi)所有的(de)燈(deng)。
   【注】：①膠片必須(xu)在曝光期間(jian)保(bao)持干(gan)燥；②確保(bao)將(jiang)多(duo)余的底(di)物從(cong)膜和(he)塑料紙上*去除；③在整(zheng)個膠片處理(li)期間，使用手套。

9. 將X光膠(jiao)片置于膜的上(shang)面(mian)。建議第一次曝光60 s。之后(hou)可(ke)調(diao)整曝光(guang)時間以達到最佳結(jie)果(guo)。化(hua)學發(fa)光(guang)反(fan)應在底物(wu)孵育后(hou)的前5~30 min期間是強(qiang)烈的。這一反應可以持續幾個小時，但強度會隨時間下降，如有底物孵育后較長時間后曝光，曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用磷光存儲成像設備（如Bio-Rad的分(fen)子成像儀系統）或CCD照相機可能需(xu)要較長的曝光時間。
   【注(zhu)】：膠片(pian)與膜之間的任何(he)移(yi)動可能在膠片(pian)上造(zao)成(cheng)人為的非特(te)異信號。

10. 使(shi)用合適的顯(xian)影(ying)劑和(he)定影(ying)劑對膠片進行(xing)顯(xian)影(ying)。如果信號(hao)太(tai)強，則縮短曝(pu)光時(shi)間(jian)或將印記膜進行(xing)剝離(li)并降低抗(kang)體(ti)濃度(du)重新檢測(ce)。

1. 本產品僅限于科學實驗研究使用(yong)，不得用(yong)于臨床診斷、治療等領域(yu)。

2. 為獲得(de)最佳效果，必須(xu)優化該系(xi)統的全部組分(fen)，包括(kuo)樣品量、一抗(kang)和二(er)抗(kang)濃度以及膜和封閉試劑的類型。

3. 使(shi)用(yong)本產品比使用沉淀比色HRP底物檢測所(suo)需的抗體(ti)(ti)(ti)濃度低。為優化抗體(ti)(ti)(ti)濃度，請進行一次系(xi)統的點印(yin)跡分析。

4. 沒(mei)有一種(zhong)封閉(bi)試劑(ji)對所(suo)有系統(tong)而言都是最佳的(de)(de)，所(suo)以(yi)為每一個免(mian)疫印跡檢測系統(tong)找到最合適的(de)(de)封閉(bi)緩(huan)沖液非常必(bi)需。封閉(bi)試劑(ji)有可(ke)能(neng)與抗體產生交叉(cha)反應，導(dao)致(zhi)出(chu)現(xian)非特異性信(xin)號(hao)。封閉(bi)緩(huan)沖液同(tong)時(shi)也會影響系統(tong)的(de)(de)靈敏性。當從一種(zhong)底(di)(di)物轉換為另一種(zhong)底(di)(di)物時(shi)，有時(shi)會出(chu)現(xian)信(xin)號(hao)衰減或背景增(zeng)加的(de)(de)現(xian)象，原因可(ke)能(neng)是封閉(bi)緩(huan)沖液不(bu)適合新的(de)(de)檢測系統(tong)。

5. 使(shi)用親和(he)素/生*素檢測系(xi)統(tong)時，避免使用牛(niu)奶作為封閉試劑，因為牛(niu)奶中含有不定量(liang)的內源(yuan)性(xing)生*素，會導致高背景(jing)信號。

6. 保(bao)證洗滌(di)(di)緩沖液(ye)、封閉(bi)緩沖液(ye)、抗體(ti)溶(rong)液(ye)和底物工作液(ye)的使用體(ti)積，以確(que)保(bao)在整(zheng)個(ge)實驗過程中印跡(ji)膜*被液(ye)體(ti)覆(fu)蓋(gai)，避免膜變干。增大(da)封閉(bi)緩沖液(ye)及洗滌(di)(di)緩沖液(ye)的使用量可以降低非特異性的信號。

7. 為獲得最佳效果，在孵育步驟請使(shi)用搖床。

8. 將Tween20(終濃度0.05~0.1%)加(jia)入封閉緩沖液(ye)和(he)稀釋的抗(kang)體溶液(ye)，以(yi)降低(di)非特異(yi)信號。使用高品質(zhi)的產品，如去污(wu)劑。它(ta)保存在安瓿(bu)中，過氧化物和(he)其(qi)他雜質(zhi)含量很低(di)。

9. 不要使用diedanna作為(wei)緩(huan)沖液(ye)的(de)防腐(fu)劑。diedanna是HRP的(de)抑制。
   

10. 避免手(shou)(shou)與膜直接接觸，實驗(yan)過程(cheng)應戴手(shou)(shou)套或使用干(gan)凈的鑷子。

11. 所有設備必(bi)須(xu)清潔且不沾染外(wai)來物質。金屬器械（如(ru)剪刀）不得具有可(ke)見的銹跡。銹跡可(ke)能導致斑(ban)點形成和高背景。

12. 底物工作液(ye)在(zai)室溫下可穩定8 h。日(ri)光或(huo)任何(he)其他強光下(xia)可能損害底物，為獲得(de)最佳結(jie)果，將底物工作(zuo)液(ye)保存在琥珀色瓶中，并避免長期(qi)暴漏在任何(he)強光下(xia)，短時間暴漏于實驗室常規照明不會(hui)損害該(gai)工作(zuo)液(ye)。
    

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