CFDA, SE 細胞增殖示蹤熒光探針

產品描述(shu)

CFDA-SE分子式為C₂₉H₁₉NO₁₁，分子(zi)量為557.47，CAS號為150347-59-4，CFDA SE英(ying)文名是(shi)Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，CFDA-SE可(ke)用(yong)于細(xi)胞(bao)示蹤，也(ye)可(ke)用(yong)于細(xi)胞(bao)增(zeng)殖檢測。CFDA SE可(ke)以通(tong)過完好的細(xi)胞(bao)膜，進入細(xi)胞(bao)后(hou)被細(xi)胞(bao)內的酯(zhi)酶(esterase)催化(hua)分解(jie)成CFSE，CFSE可(ke)以隨機地(spontaneously)、不可(ke)逆地和細(xi)胞(bao)內蛋白(bai)的賴(lai)氨酸殘基（Lysine）或其(qi)它氨基發生結合反(fan)應，并標(biao)記(ji)這些(xie)蛋白(bai)。在(zai)加入熒光探針CFDA SE后(hou)大約(yue)24小時，即可(ke)充分標(biao)記(ji)細(xi)胞(bao)。被CFDA SE標(biao)記(ji)的非分裂(lie)細(xi)胞(bao)的熒光非常穩定，標(biao)記(ji)時間(jian)可(ke)達數個月(yue)。

CFDA, SE標(biao)記細(xi)胞(bao)(bao)呈(cheng)綠色熒(ying)光，檢測(ce)時的(de)激發波(bo)長可(ke)以選擇488nm激發，發射波(bo)長為518nm，使(shi)用流式細(xi)胞(bao)(bao)儀檢測(ce)時可(ke)以采用FL1 檢測(ce)通道。除了流式細(xi)胞(bao)(bao)儀檢測(ce)細(xi)胞(bao)(bao)增殖外，還可(ke)用熒(ying)光酶標(biao)板(ban)定量活細(xi)胞(bao)(bao)數(shu)目，或(huo)者用熒(ying)光顯微鏡進(jin)行均一染色的(de)細(xi)胞(bao)(bao)示蹤(zong)觀察。

CFDA-SE標記的(de)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)每分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)一(yi)(yi)次(ci)(ci)(ci)，子代(dai)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)熒光會(hui)減(jian)弱一(yi)(yi)半(ban)(ban)，這樣通過流式細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)儀(yi)(yi)檢(jian)測(ce)(ce)就可以(yi)檢(jian)測(ce)(ce)出(chu)沒有(you)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)一(yi)(yi)次(ci)(ci)(ci)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)熒光強度減(jian)半(ban)(ban)(1/2)，分(fen)(fen)(fen)離(li)兩次(ci)(ci)(ci)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)熒光強度再減(jian)半(ban)(ban)(1/4)，以(yi)此類推，熒光強度按(an)照1/2，1/4，1/8，1/16的(de)規律逐(zhu)漸遞減(jian)。采用(yong)CFDA SE通過流式細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)儀(yi)(yi)檢(jian)測(ce)(ce)獲得的(de)檢(jian)測(ce)(ce)結(jie)果每一(yi)(yi)個峰(feng)代(dai)表一(yi)(yi)種分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)次(ci)(ci)(ci)數(shu)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，從右至(zhi)左(zuo)的(de)峰(feng)通常依次(ci)(ci)(ci)為分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)0次(ci)(ci)(ci)、1次(ci)(ci)(ci)、2次(ci)(ci)(ci)、3次(ci)(ci)(ci)等次(ci)(ci)(ci)數(shu)的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)。分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)次(ci)(ci)(ci)數(shu)較(jiao)多后(hou)，分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)0次(ci)(ci)(ci)或1次(ci)(ci)(ci)等沒有(you)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)或分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)次(ci)(ci)(ci)數(shu)較(jiao)少的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)會(hui)逐(zhu)漸減(jian)少直至(zhi)檢(jian)測(ce)(ce)不到(dao)。CFSA，SE可檢(jian)測(ce)(ce)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)次(ci)(ci)(ci)數(shu)多達八次(ci)(ci)(ci)甚至(zhi)更(geng)多。經CFDA, SE標記的(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)可用(yong)于(yu)(yu)體(ti)外和體(ti)內增(zeng)殖研究(jiu)，且(qie)具有(you)不會(hui)使鄰(lin)近細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)染色(se)的(de)功能。CFDA, SE常用(yong)于(yu)(yu)淋巴(ba)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)增(zeng)殖檢(jian)測(ce)(ce)，也可用(yong)于(yu)(yu)成纖維細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，自然殺傷細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)，造(zao)血(xue)祖(zu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)等其他細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)增(zeng)殖檢(jian)測(ce)(ce)。CFDA SE如果和其它熒光探(tan)針聯用(yong)，可以(yi)獲取不同(tong)分(fen)(fen)(fen)裂(lie)(lie)次(ci)(ci)(ci)數(shu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)(bao)(bao)的(de)其它相關信息。我(wo)們的(de)CFDA SE探(tan)針產品(pin)以(yi)25mg粉末包裝(zhuang)的(de)形(xing)式提供。

運輸與保存方(fang)法

常溫運(yun)輸(shu)，-20℃干燥(zao)避光(guang)保存(cun)，保質期24個月(yue)。避免(mian)反復(fu)多(duo)次凍(dong)融。

使(shi)用(yong)方(fang)法

1.保(bao)存液(ye)配制（5mM）

按需配制，如取DMSO 360μL，溶解1mg CFSE，超音波溶解，得到5mM CFSE保存(cun)(cun)液；將其按40μL體(ti)積分裝于避(bi)光(guang)的無菌(jun)凍存(cun)(cun)管中，-20℃可保存(cun)(cun)2個月。

注意：CFSE遇水容易分解，所以在(zai)配置時候(hou)要用(yong)無水DMSO，配置后(hou)計(ji)算用(yong)量(liang)盡快(kuai)使(shi)用(yong)，多余的(de)立刻避光(guang)保存-20℃。DMSO是有(you)機溶劑，對于蛋白質會有(you)損傷，所以在(zai)配置的(de)時候(hou)DMSO用(yong)量(liang)越少越好；

2. 工作(zuo)液配制(zhi)

取5mM的CFSE稀釋液1 ul，加入1ml 10％FCS 的PBS稀釋。

3.染色

a.重懸細胞。用有5％FCS的PBS重懸細胞，細胞濃度一般為1x1x10⁶/ml （體外實驗）或1x1x10⁷/ml（轉染(ran)實驗(yan)）。

b.染色(se)。1ml DFSE工作液與1ml細胞懸液混合后37℃孵育5－10分鐘。期間輕(qing)輕(qing)混勻兩次（用手輕(qing)彈管壁，切忌吹打）。

c.終止染色。用*培(pei)養液洗滌3次(ci)并離心。一(yi)般(ban)在第2次(ci)洗滌后再孵育5分(fen)鐘后進行(xing)第3次(ci)洗滌。冰冷(leng)的含(han)10 %新生牛血清RPMI1640（先加入1ml混勻 ，然(ran)后續加入7ml）, 輕(qing)輕(qing)混勻1min（用手輕(qing)彈，切(qie)忌吹打）,1 500 r/ min 離心5 min。

d.流式細胞儀在FL1通道檢測。