產(chan)品描述
　　PikoOrange Protein Quantitation Kit是一(yi)個高(gao)度敏感的基于熒光技(ji)術定量純化蛋白質的試(shi)劑(ji)盒，其檢測蛋白濃(nong)度范圍為0.1~10 μg/ml。比起傳統定量方法如BCA、Bradford或Lowry蛋白定量分析，PikoOrange蛋白定量試劑盒敏感性更佳，此外，與NanoOrange蛋白質定量測定技術相比具有更好的的線性和重現性。PikoOrange蛋白定量試劑盒可顯示不同蛋白質之間的小變異性，且熒光信號穩定長達16 h；其受測(ce)樣本不論為純化蛋白或(huo)抗體皆適用。需特別注意的是，PikoOrange對鹽(yan)類、緩(huan)沖液、去垢劑或是其他(ta)化學物(wu)質(zhi)都有不同(tong)程度的耐受性（表1）。
產品信息

產品組分

運輸與(yu)保存
常(chang)溫運輸。組(zu)(zu)分A常(chang)溫保存(cun)；組(zu)(zu)分B常(chang)溫避光保存(cun)；組(zu)(zu)分C  4℃ 保存。有效期36個(ge)月。
【注】：如果緩沖液(ye)出(chu)現沉(chen)淀，可加熱到37℃并漩渦溶解(jie)。
使用方法

1. 制備1x PikoOrange緩沖(chong)液: 1:10 稀(xi)釋10x緩沖(chong)液在dH₂O。例如(ru)，添加(jia)1 mL10x 緩沖液至(zhi)9 mL dH₂O。 PikoOrange緩沖液可(ke)以儲存在(zai)室(shi)溫下。

2. 使用(yong)前準(zhun)備(bei)PikoOrange工(gong)作液(ye)：將200xPikoOrange染料按1:200用(yong)1x PikoOrange緩(huan)沖(chong)液(ye)稀釋。例如，添加25 μL 500x PikoOrange染料(liao)至5 mL 1x PikoOrange緩沖液。
   注意(yi)：您(nin)將需要大約3 mL工作(zuo)液制(zhi)作(zuo)標準(zhun)曲線（見表2)以(yi)及每(mei)孔(kong)檢測樣品250 μL工作液。

3. 準備未知(zhi)樣本：10 μL 樣本添(tian)加 250 μL PikoOrange工作液。
   注意(yi)：您可能需要稀釋(shi)未知(zhi)樣本以(yi)得到不(bu)同濃度(du)的(de)樣本。樣品稀釋可能會減少干擾物質的(de)影響。

4. 準備一個蛋(dan)白質標準曲線所(suo)需的BSA濃(nong)度，如表2所示(shi)。

5. 樣本和標(biao)準蛋白加熱(re)至90~ 95℃ 10分鐘(zhong)，此過程需避光(guang)操作。

6. 取出(chu)樣本室溫避光放置(zhi)20 min冷(leng)卻。短時間離心收集全部樣本。

7. 每個標準樣(yang)品或未知樣(yang)品取200 μL轉移(yi)到96孔(kong)酶(mei)標板，熒光(guang)酶(mei)標儀讀數。激(ji)發/發射波長為(wei)480/598 nm。
   【注】：樣品可以被轉(zhuan)移(yi)到熒光試管(guan)使用熒光儀(yi)測量。如果需要超(chao)過200 μL體積測量，等比例放(fang)大(da)配置方案。
   
   表(biao)1：PikoOrange對不同(tong)化學物(wu)質的耐受性

表2：準備BSA樣(yang)品制作標準曲線

	BSA體(ti)積		工作液體積	BSA 終濃(nong)度（μg/mL）
A	5 μL BSA std (2 mg/mL)		995 μL	10
B	250 μL solution A		250 μL	5
C	250 μL solution B		250 μL	2.5
D	200 μL solution C		300 μL	1
E	250 μL solution D		250 μL	0.5
F	250 μL solution E		250 μL	0.25
G	100 μL solution F		150 μL	0.1
H	0 μL solution G		250 μL	0
圖(tu)1：PikoOrange比NanoOrange有更好的線性(xing)和重現性(xing)

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EZ ECL 化(hua)學發光液（增強型）（貨(huo)號(hao)：AP34L014）