產品(pin)描述

　　Cell Counting Kit-8 (CCK-8試(shi)劑盒)，是(shi)一種基于WST-8（化學名(ming)：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）而廣泛(fan)應(ying)用于細(xi)胞增殖和細(xi)胞毒性的快速、高(gao)靈(ling)敏度的比(bi)色檢測試劑盒。檢測原理為(wei)：WST-8在電子耦合劑1-Methoxy PMS存在的(de)(de)情況下，可以被線粒體內的(de)(de)一些脫(tuo)氫酶還原生(sheng)成橙黃(huang)色的(de)(de)水溶性的(de)(de)甲臜（formazan，參考圖1)，生(sheng)成的(de)(de)甲臜的(de)(de)顏色深淺與細胞(bao)增殖成正比(bi)，與細胞(bao)毒(du)性成反(fan)比(bi)。使用酶標(biao)儀在450nm 波長處測定OD 值，間(jian)接反(fan)映活細胞(bao)數量。
　　本產品可(ke)用于細胞(bao)增(zeng)殖(zhi)測(ce)定(ding)，細胞(bao)毒性的檢測(ce)，藥(yao)物篩選(xuan)，以及細胞(bao)生(sheng)長抑制(zhi)檢測(ce)等。

圖(tu)1：WST-8分子結(jie)構及(ji)檢測(ce)原理
訂購信息(xi)

運(yun)輸與保存
藍冰運輸。-20℃保存，有效期(qi)24個月。【注】：反復凍(dong)融會(hui)造成測定背(bei)景(jing)OD值升高。
使(shi)用方法

1. 以96孔(kong)(kong)板(ban)為例(li)，96孔(kong)(kong)板(ban)中每孔(kong)(kong)接種100 μL的細(xi)胞懸液(ye)，在細(xi)胞培(pei)養箱預培(pei)養24 h。

2. 向每孔加入10 μL不(bu)同(tong)濃度的(de)待測物質。如果僅測定細胞活性，則不(bu)需要2~3步驟，直接從第四步操作。

3. 將培(pei)養板在培(pei)養箱孵育一(yi)段適當的時間 (依(yi)據待測藥物而定)。

4. 向每孔加入10 μL CCK-8溶液 (注(zhu)意不要產生氣泡，輕(qing)輕(qing)混勻)。

5. 將培養板在培養箱內(nei)孵育適當時間（一(yi)般0.5~2 h）。

6. 酶(mei)標儀測定450 nm處的吸光值。

注(zhu)意事(shi)項

1. 本產品僅(jin)限于科(ke)學(xue)實驗(yan)研究使用(yong)，不(bu)得(de)用(yong)于臨床診斷、治療等(deng)領域(yu)。

2. 建議調試合(he)適(shi)的(de)(de)接種細(xi)胞(bao)(bao)的(de)(de)數(shu)(shu)量和(he)加入(ru)CCK-8溶(rong)液后(hou)培養(yang)的(de)(de)時(shi)間(jian)。當使用標準(zhun)96 孔板時(shi)，貼壁細(xi)胞(bao)(bao)至少1000 個/ 孔(100 μL 培養(yang)基(ji))，白細(xi)胞(bao)(bao)至少2500 個/ 孔(100 μL 培養(yang)基(ji))。建議實(shi)驗前設(she)定(ding)幾個不同細(xi)胞(bao)(bao)數(shu)(shu)量的(de)(de)梯度孔進行(xing)條件(jian)測(ce)(ce)試，細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)時(shi)間(jian)和(he)處理方法根據實(shi)驗情況而定(ding)，加入(ru)CCK-8溶(rong)液后(hou)（加入(ru)體(ti)積為每孔細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)液體(ti)積的(de)(de)10%），在37℃細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)箱中孵(fu)育，不同時(shi)間(jian)點后(hou)測(ce)(ce)450 nm處的(de)(de)吸光值(CCK-8敏(min)感性高，一些細(xi)胞(bao)(bao)0.5 h后(hou)就可以測(ce)(ce)定(ding)第一次)。

3. CCK-8試劑盒的(de)(de)檢測依(yi)賴于脫氫(qing)酶催(cui)化(hua)反應，如果待(dai)檢測體系(xi)中有較(jiao)多還(huan)原(yuan)劑（或抗氧化(hua)劑）會造成背(bei)景OD值(zhi)升高，干(gan)擾檢測結果。如果實驗(yan)中有還(huan)原(yuan)劑，請檢查(cha)背(bei)景的(de)(de)OD值(zhi)，設法先(xian)去除(chu)(chu)還(huan)原(yuan)劑干(gan)擾。例如，可在加(jia)入CCK-8溶液之前更換新鮮(xian)的(de)(de)培(pei)養(yang)基，以去除(chu)(chu)待(dai)測藥物的(de)(de)影響。當待(dai)測藥物影響比較(jiao)小時，可以不更換培(pei)養(yang)基，直(zhi)接扣除(chu)(chu)培(pei)養(yang)基中加(jia)入待(dai)測藥物后的(de)(de)空白吸(xi)收即(ji)可。

4. 進行藥物抑制實驗(yan)時(shi)，如(ru)果藥物中含有(you)金屬(shu)，如(ru)Pb²⁺、Fe²⁺、Cu²⁺等金屬會對CCK-8 Solution的顯(xian)色反(fan)應產生影響，從而導致檢(jian)測的靈敏(min)度降低(di)。

5. 如果(guo)細(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)時(shi)間(jian)較(jiao)長，培(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)顏色發生變化，應洗滌細(xi)胞更換培(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)后再加CCK-8檢測(ce)。細(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)基(ji)(ji)酚紅不影(ying)響測(ce)定結果(guo)。

6. 為使CCK-8試(shi)劑盒培(pei)養基充分(fen)混勻(yun)，減少CCK-8在(zai)移液器上的殘留，建議加樣前用培(pei)養基稀釋(shi)CCK-8試(shi)劑，混勻(yun)后加樣。

7. 若暫時(shi)不測定OD值，可以向每孔中加入(ru)0.1 M 的(de)HCL 溶(rong)液(ye)或者1% w/v SDS 溶(rong)液(ye)，室溫避光保(bao)存，24 h 內檢測，吸(xi)光度(du)不會受到影響。(加入(ru)1% SDS 溶(rong)液(ye)的(de)體積與加入(ru)CCK-8溶(rong)液(ye)的(de)體積相同)。

8. 如果吸光值很低(di)，可以(yi)適當增加細胞數量或者延長加入CCK-8溶液后孵(fu)育的時(shi)間。

9. 為了您的安全(quan)和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操(cao)作。

CCK-8法(fa)的(de)優勢(shi)

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