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活性檢測CCK-8細胞增殖與毒性檢測試劑盒

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 細胞(bao)增殖(zhi)與活(huo)性檢(jian)測(ce)試劑盒(he)是(shi)一種基于WST-8的(de)(de)廣泛(fan)應(ying)用(yong)于細胞(bao)增殖(zhi)和細胞(bao)毒(du)(du)性的(de)(de)快速高靈敏(min)度檢(jian)測(ce)試劑盒(he)。其主要成(cheng)(cheng)分為水溶(rong)(rong)性四(si)唑(zuo)(zuo)鹽WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯(ben)基)-3-(4-硝苯(ben)基)-5-(2,4-二磺基苯(ben))-2H-四(si)唑(zuo)(zuo)單鈉鹽)，WST-8是(shi)一種類似于MTT的(de)(de)化合物，在電子耦合試劑存在的(de)(de)情況下，可以被線(xian)(xian)粒體(ti)內的(de)(de)一些脫氫(qing)酶還原(yuan)生成(cheng)(cheng)橙黃色的(de)(de)水溶(rong)(rong)性的(de)(de)甲臜（formazan，參考圖1)。WST-8 被細胞(bao)內脫氫(qing)酶生物還原(yuan)后生成(cheng)(cheng)的(de)(de)甲臜能(neng)夠直接溶(rong)(rong)解在培養(yang)基中。細胞(bao)增殖(zhi)越(yue)(yue)多越(yue)(yue)快，則顏色越(yue)(yue)深(shen)；細胞(bao)毒(du)(du)性越(yue)(yue)大，則顏色越(yue)(yue)淺。對于同樣的(de)(de)細胞(bao)，顏色的(de)(de)深(shen)淺和細胞(bao)數目呈線(xian)(xian)性關系。

圖(tu)1：WST-8分子結構及檢測原理

運輸(shu)與保(bao)存方法

冰(bing)袋(dai)運輸。CCK-8在(zai)4℃可(ke)保存一年(nian)，在(zai)-20℃可(ke)以存放數年(nian)，反復凍融(rong)會造(zao)成測(ce)定背(bei)景O.D值升高，如經常使用，建議存放于4℃即(ji)可(ke)。

操作方法(fa)

1. 在(zai)96孔板中(zhong)配制(zhi)100 μl的細(xi)胞(bao)懸液(ye)。將培(pei)養板在(zai)培(pei)養箱預培(pei)養24小時(shi) (在(zai)37℃，5% CO2的條件(jian)下(xia))。

2. 向培養板加入10 μl不(bu)同濃度的待(dai)測(ce)物質。如果測(ce)定細(xi)胞活性，則不(bu)需要2-3步(bu)驟(zou)，直接從第四(si)步(bu)操作(zuo)。

3. 將培養(yang)板在培養(yang)箱(xiang)孵育一段(duan)適當的時(shi)間 (例如: 6,  12, 24或48小(xiao)時(shi))。

4. 向每孔(kong)加入10 μl CCK-8溶(rong)液 (注意不(bu)要在孔(kong)中生(sheng)成氣泡，它們會影響(xiang)O.D值的讀數)。

5. 將(jiang)培(pei)養(yang)板(ban)在培(pei)養(yang)箱內(nei)孵育(yu)1-4小時。

6. 用酶標儀測定(ding)在450 nm處的吸(xi)光度。

注意事(shi)項

1）CCK-8試劑(ji)(ji)盒的(de)檢(jian)測依賴于脫(tuo)氫酶催化反(fan)應(ying)，如果待檢(jian)測體系中(zhong)有較多(duo)還原劑(ji)(ji)（或抗氧(yang)化劑(ji)(ji)）會(hui)造成背景(jing)O.D值(zhi)(zhi)升高，干擾(rao)檢(jian)測結(jie)果。如果實(shi)驗中(zhong)有還原劑(ji)(ji)，請檢(jian)查(cha)背景(jing)的(de)O.D值(zhi)(zhi)，即測定(ding)、比較空(kong)白(bai)培(pei)養(yang)基(ji)加(jia)(jia)入藥物與不加(jia)(jia)藥物的(de)培(pei)養(yang)基(ji)（含細(xi)胞）在加(jia)(jia)入CCK- 8試劑(ji)(ji)后的(de)O.D值(zhi)(zhi)，如果空(kong)白(bai)O.D值(zhi)(zhi)明(ming)(ming)顯偏(pian)高，則說明(ming)(ming)有反(fan)應(ying)，應(ying)設法去除(chu)或折算干擾(rao)因素。

2）如果細(xi)胞(bao)培養時間(jian)較長，培養基(ji)(ji)顏色發生變化(hua)，應洗滌(di)細(xi)胞(bao)更換培養基(ji)(ji)后再加CCK-8檢測。細(xi)胞(bao)培養基(ji)(ji)酚紅(hong)不影響測定結果。

3）為使CCK-8試劑盒(he)培養(yang)基充(chong)分混勻，減少CCK-8在(zai)移液器上(shang)的殘留(liu)，建議加樣前用培養(yang)基稀釋(shi)CCK-8試劑，混勻后加樣。

4）為(wei)了您(nin)的安全和健康，請穿實驗服并戴一次(ci)性手(shou)套操作(zuo)。

CCK-8與(yu)同類試劑(ji)比較

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